[發(fā)明專(zhuān)利]一種α-氨基酸酯水解酶制備非均相生物催化劑的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910058710.9
• 申請(qǐng)日: 2009-03-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101845432A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣寧;斯克利亞仁科·安娜;蔣用;庫(kù)偌什金娜·瓦連金娜;胡遠(yuǎn)輝;薩塔偌娃·熱尼;王明蓉;克列斯季安洛瓦·伊琳娜;霍強(qiáng);熊輝
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)總公司四川抗菌素工業(yè)研究所;俄羅斯聯(lián)邦國(guó)家科學(xué)中心工業(yè)微生物遺傳育種研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N11/08
• 分類(lèi)號(hào): C12N11/08;C12R1/64
• 代理公司: 成都信博專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 51200
• 代理人: 陶紅

1.一種α-氨基酸酯水解酶制備非均相生物催化劑的方法，其步驟如下：

1)取VKPM?B-9915或CGMCC?No.2339菌株的菌絲體細(xì)胞不做冷凍處理而直接懸浮于Tris-HCl緩沖液中，加入巰基乙醇以穩(wěn)定酶；

2)加入乙酸丁酯破碎菌絲體細(xì)胞，加熱，將反應(yīng)器溫度維持在30℃，控制初始pH值不得高于pH8.0，在反應(yīng)過(guò)程中pH值會(huì)下降，在下降到pH7.1時(shí)，滴加12.5％氨溶液以維持pH?7.1±0.1，6-7小時(shí)50分鐘后，氨溶液的消耗速度與初始值比較降低1.8-2.0倍時(shí)，酶提取過(guò)程完成；

3)將酶提取液快速冷卻至15-20℃，加入絮凝劑，離心分離破碎的菌絲體細(xì)胞，得無(wú)細(xì)胞提取液，殘?jiān)靡宜徕c緩沖液洗滌，洗滌液離心分出，并入無(wú)細(xì)胞提取液中，調(diào)節(jié)pH到6.8-7.2范圍內(nèi)；

4)把無(wú)細(xì)胞提取液加入反應(yīng)器，冷卻至2-4℃，加聚乙二醇到無(wú)細(xì)胞提取液中，攪拌15分鐘，再加入25％戊二醛水溶液反應(yīng)混合物在2-4℃下輕微搖動(dòng)，孵化2小時(shí)，將制得的固體顆粒減壓濾出，洗滌至濾液無(wú)色制得交聯(lián)蛋白(酶)聚集體形態(tài)的濕的無(wú)載體非均相生物催化劑。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于菌絲體細(xì)胞不做冷凍處理而直接懸浮于Tris-HCl緩沖液中時(shí)其溫度不高于20℃。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于用作絮凝劑的是水溶性的多聚陰離子含有季銨鹽基的Flocaton?PPS-400。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于聚乙二醇的分子量為6000-8000。