[發明專利]一種道古霉素關鍵中間體A40926 BO組分的純化制備方法

有效

• 申請號: 200910058576.2
• 申請日: 2009-03-12
• 公開（公告）號: CN101851277A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 朱輝;鄒敬源;韓曉彤;王元樺;莫洪;劉巍;陶永祥;朱宇;楊旭臣
• 申請（專利權）人: 成都雅途生物技術有限公司
• 主分類號: C07K9/00
• 分類號: C07K9/00
• 代理公司: 成都信博專利代理有限責任公司 51200
• 代理人: 陶紅

技術領域

本發明涉及道古霉素(dalbavancin)關鍵中間體A40926?B₀組分的純化制備方法，即可用于道古霉素合成的、色譜純度大于97％的A40926?B₀組分的制備方法。

背景技術

道古霉素(Dalbavancin)是第二代新型半合成糖肽類抗生素，其結構與萬古霉素、替考拉寧相似，用于革蘭氏陽性病原菌引起的嚴重系統組織感染。道古霉素是由放線菌次級代謝產物A40926的B₀組分經過結構修飾而得，在體內外較萬古霉素和替考拉寧具有更廣泛的抗菌譜，對包括葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌以及甲氧西林耐藥菌株在內的所有凝固酶陰性葡萄球菌(coagulase-negative?stapHycoccus，CoNS)均有效，且活性明顯優于萬古霉素和替考拉寧，尤為適用于治療由耐MRSA、CoNS以及鏈球菌(streptococcus)，包括耐青霉素的肺炎球菌等革蘭氏陽性菌引起的嚴重感染。動物實驗及國外的一些臨床實驗研究結果表明：道古霉素在高于治療劑量數倍的靜脈給藥中顯示出良好的耐受性，且道古霉素在體內呈現良好的藥物動力學特征，有高而持久的血藥濃度，成為唯一可隔周給藥的注射抗生素。

從A40926?B₀組分出發，經酯化、酰胺化、水解，最后才能得到道古霉素，因此制備高純度A40926?B₀組分是道古霉素合成的關鍵。道古霉素關鍵中間體A40926?B₀組分為放線菌的次級代謝產物，是通過微生物發酵獲得的。由于微生物發酵產物成分復雜，再加上A40926?B₀組分結構復雜，對熱、酸穩定性差等特點，因此，制備高純度A40926?B₀組分難度非常大，同時，這也是道古霉素制備工藝的關鍵所在，目前尚無A40926?B₀組分制備相關的文獻報道。

A40926?B₀組分的結構式如下：

R₁：-(CH₂)₈CH(CH₃)₂

M：α-D-mannopyranosyl

發明內容

本發明的主要目的是為了解決道古霉素關鍵中間體A40926?B₀組分純化問題，并提供用于制備道古霉素的高純度A40926?B₀組分(色譜純度大于97％)。

為了達到上述目的，本發明提供了一種高純度道古霉素關鍵中間體A40926B₀組分的制備方法，該方法包括以下步驟：

步驟一：將粗品進行凝膠層析、大孔吸附分離以得到A40926?B₀組分的半純品。

步驟二：將上述A40926半純品進行反相柱層析，減壓濃縮，可得高純度A40926?B₀組分，其色譜純度可達97％以上。

根據本發明，凝膠層析采用葡聚糖凝膠和瓊脂糖凝膠進行層析。

根據本發明，大孔吸附分離采用平均孔徑為70～100埃的多孔性吸附樹脂D140、D141進行分離。

根據本發明，反相柱為C8或C18柱，其柱料的粒徑為20～50μm。

根據本發明，所述反相柱層析上樣方法為：用5％左右的乙醇溶液溶解樣品，溶解后樣品的濃度為5g/L左右，然后再加入分析純的氯化鈉，使氯化鈉的濃度為5％左右，然后用1N氫氧化鈉調節pH至7.5～8.5，然后上樣。

根據本發明，反相層析柱在上樣前先用5％的乙醇溶液平衡柱子，上樣后用10％乙醇加5％氯化鈉的水溶液沖洗柱子，沖洗3～8個柱體積。

根據本發明，反相柱層析的解析劑為10～15％乙醇溶液。

根據本發明，減壓濃縮溫度為45～70℃，典型的濃縮溫度為55～60℃。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明進行更進一步詳細說明，但不是對本發明的限定。另外，除非另有說明，在本說明書中，一般操作均是在室溫條件下進行的，室溫是指5-30℃。

實施例1