[發明專利]一種制備肺炎鏈球菌噬菌體裂解酶的方法

無效

• 申請號: 200910057924.4
• 申請日: 2009-09-22
• 公開（公告）號: CN102021161A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發明（設計）人: 黃青山;陸海榮
• 申請（專利權）人: 昆山博青生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/70;C12R1/19;C12R1/46
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備肺炎鏈球菌噬菌體裂解酶的方法，包括如下步驟：

(1)表達載體的構建：將編碼肺炎球菌噬菌體裂解酶CPL-1氨基酸序列的基因序列與啟動子相連；

(2)轉化大腸桿菌，使其含有步驟(1)所構建的載體，培養發酵；

(3)從發酵液中分離純化肺炎球菌噬菌體裂解酶CPL-1。

2.根據權利要求1所述的制備肺炎鏈球菌噬菌體裂解酶的方法，其特征在于，步驟(2)中噬菌體裂解酶CPL-1的表達為誘導表達。

3.根據權利要求1所述的制備肺炎鏈球菌噬菌體裂解酶的方法，其特征在于，所述及的載體是大腸桿菌表達用載體pET28a。

4.根據權利要求1所述的制備肺炎鏈球菌噬菌體裂解酶的方法，其特征在于，步驟(1)中的啟動子是T7啟動子。

5.根據權利要求1所述的制備肺炎鏈球菌噬菌體裂解酶的方法，其特征在于，步驟(3)的肺炎球菌噬菌體裂解酶CPL-1的分離純化包括如下步驟：

(1)菌體沉淀懸浮于破菌緩沖液中，經破菌，離心，收集上清液；

(2)步驟(1)的上清液上樣至用平衡緩沖液平衡好的DEAE-Sepharose層析柱，用清洗緩沖液清洗至紫外檢測保證層析柱平衡至基線，用平衡緩沖液清洗2-5個柱體積；

(3)用洗脫緩沖液將肺炎鏈球菌噬菌體裂解酶從層析柱上洗脫并收集洗脫液，洗脫液透析、凍干。

6.根據權利要求5所述的制備肺炎鏈球菌噬菌體裂解酶的方法，其特征在于，所述及的破菌緩沖液為pH7.0-9.0的含有2mmol/L?EDTA的20mmol/L?Tris-HCl緩沖液，平衡緩沖液為pH6.0-8.0的25mM磷酸緩沖液，清洗緩沖液為pH6.0-8.0的含1-2M?NaCl的25mM磷酸緩沖液，洗脫緩沖液為pH6.0-8.0的含1-5％氯化膽堿的25mM磷酸緩沖液。