[發明專利]月季熱激蛋白啟動子、其克隆方法及其應用

有效

• 申請號: 200910056637.1
• 申請日: 2009-08-18
• 公開（公告）號: CN101993870A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發明（設計）人: 明鳳;張璇;蔣昌華
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12P19/34;C12N15/82
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴;包兆宜

技術領域

本發明屬于分子生物學、基因工程技術領域，涉及一種熱誘導型啟動子RcHSP17.8P核苷酸編碼序列的克隆，此啟動子重組表達載體的構建，以及轉入草本植物的雙子葉植物中啟動下游蛋白表達的方法。

背景技術

啟動子可以與依賴于DNA的RNA聚合酶識別并與之結合，從而起始基因轉錄的一段DNA序列，是基因表達調控的重要元件，一般位于轉錄起始位點上游幾十個堿基處.在核心啟動子上游通常會有一些特殊的DNA序列，即順式作用元件，轉錄因子與之結合從而激活或抑制基因的轉錄。它與RNA聚合酶及其他蛋白輔助因子等反式作用因子的相互作用是啟動子調控基因轉錄的實質。

根據啟動子的轉錄模式可將其分為3類：組成型啟動子、組織或器官特異性啟動子和誘導型啟動子。誘導型啟動子與另外兩類相比特點在于：它可根據需要在植物特定的發育階段、組織器官或特定的生長環境下，誘導基因準確而又選擇的起始轉錄。

溫度效應啟動子是受溫度誘導活性的啟動子，可分為熱效應和冷效應啟動子兩類。熱效應啟動子對高溫產生響應，含HSE、CCAAT-盒、AT-rich等活性元件序列。HSE含有一個3堿基的5’-GAA-3’序列，或反方向的5’-TTC-3’序列，這種三核苷重復序列相間排列，兩者之間被兩個堿基隔開，形成5’-[nGAAn][nTTCn]-3’結構。Coca等(Maria?A.Coca，ConcepciónAlmoguera，Terry?L.Thomas?and?Juan?Jordano(1996)Differential?regulation?ofsmall?heat-shock?genes?in?plants：analysis?of?a?water-stress-inducible?anddevelopmentally?activated?sunflower?promoter.Plant?Molecular?Biology，31：863-876)將向日葵的HaHSP17.7G4基因的啟動子與gus連接，轉化煙草，發現其對對高溫(42℃)、脫落酸都有應答，在胚胎形成過程中也有積累。擬南芥AtHsp90-1基因啟動子CCAAT-box缺失表明，CCAAT-box自身對熱激無反應，只有與啟動子中其它的熱激元件，如：HSEs或STREs(stressresponse?elements)共同作用才能增加熱誘導啟動子的特性(Haralampidis?K.，Milioni?D.and?Rigas?S.(2002)Plant?Physiol，129，1138-1149.)。將大豆熱激蛋白GmHSP17.3B啟動子與gus、GFP-talin融合，轉入苔蘚。通過控制熱激溫度和來調節GUS的表達量(Younousse?Saidi，Andrija?Finka，MickhailChakhporanian，Jean-Pierre?Zry¨d，Didier?G.Schaefer?and?Pierre?Goloubinoff，(2005)Plant?Molecular?Biology，59，697-711)，這使將啟動子調節功能應用于生物技術，使在植物細胞中表達可控制數量的內源或重組蛋白成為可能。與本發明相關的參考文獻有：

1.Concepción?Almoguera，Pilar?Prieto-Dapena?and?Juan?Jordano(1998)Dual?regulation?of?a?heat?shock?promoter?during?embryogenesis?stage-dependentrole?of?heat?shock?elements.The?plant?Journal，13(4)，437-446

2.D.CRONE，J.RUEDA，K.L.MARTIN，D.A.HAMILTON?and?J.P.MASCARENHAS(2001)The?differential?expression?of?a?heat?shock?promoter?infloral?and?reproductive?tissues.Plant.Cell?and?Environment，24，869-874