[發(fā)明專利]月季熱激蛋白啟動(dòng)子、其克隆方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910056637.1
• 申請(qǐng)日: 2009-08-18
• 公開（公告）號(hào): CN101993870A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 明鳳;張璇;蔣昌華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12P19/34;C12N15/82
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 吳桂琴;包兆宜

1.一種月季熱激蛋白啟動(dòng)子，其特征在于，其核苷酸編碼序列如SEQ?IDNO.1所示。

2.如權(quán)利要求1所述月季熱激蛋白啟動(dòng)子的克隆方法，其特征在于，該方法依次包括如下步驟：

(1)取月季嫩葉，抽提DNA；

(2)選擇月季熱激蛋白ORF中無酶切位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶，對(duì)(1)所得DNA充分酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng)沉淀純化后環(huán)化自連；

(3)根據(jù)月季熱激蛋白ORF的序列，采用反式PCR方法克隆得到權(quán)利要求1所述的月季熱激蛋白啟動(dòng)子。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的月季嫩葉是溫室中正常培養(yǎng)4周的月季組培盆苗的嫩葉。

4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的月季熱激蛋白ORF中無酶切位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶是Bgl?II、Apa?I、BamH?I、Sal?I、Sph?I、Sca?I、Eae?I、Hpa?I、Not?I、Rsa?I中的一種或者幾種。

5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)中利用反式PCR引物進(jìn)行三輪PCR擴(kuò)增獲得權(quán)利要求1所述的月季熱激蛋白啟動(dòng)子。

6.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，克隆此啟動(dòng)子的PCR酶為L(zhǎng)A?Taq，buffer為GC緩沖液。

7.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，克隆此啟動(dòng)子的PCR程序?yàn)?4℃預(yù)變性4min；98℃變性10s，68℃復(fù)性及延伸15min，30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10min。

8.含有如權(quán)利要求1所述月季熱激蛋白啟動(dòng)子的重組載體。

9.如權(quán)利要求1所述月季熱激蛋白啟動(dòng)子的應(yīng)用，其特征在于，將所述啟動(dòng)子的重組載體轉(zhuǎn)入植物中，以便在熱激條件下啟動(dòng)下游基因的表達(dá)。