[發明專利]一種氨基保護甘氨酸二肽衍生物的合成方法

無效

• 申請號: 200910056348.1
• 申請日: 2009-08-13
• 公開（公告）號: CN101654473A
• 公開（公告）日: 2010-02-24
• 發明（設計）人: 唐曉華;劉錫玲
• 申請（專利權）人: 上海力智生化科技有限公司
• 主分類號: C07K5/062
• 分類號: C07K5/062;C07K1/06
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 張 磊

技術領域

本發明涉及一種氨基保護甘氨酸二肽衍生物的合成方法。

背景技術

氨基保護的甘氨酸二肽(P-Gly-Gly-OH)是合成多肽藥物中多肽生物精細品的重要中間體。9-芴甲氧羰基(Fmoc-)是堿性敏感保護基，叔丁氧羰基(Boc-)是酸性敏感保護基，乙酰基(Ac-)相對于前兩種保護基對酸堿性較穩定，只有在強酸堿條件下才可去保護。這種對酸堿的不同性質使得用這三種基團保護的甘氨酸二肽在多肽合成中被廣泛使用。因此，開發這三種基團保護的甘氨酸二肽衍生物的合成工藝顯得尤為重要。

現有技術美國專利US20020098567開發了將甘氨酸二肽與等摩爾的碳酸氫鈉和乙酸酐在水中15℃下反應得到N-乙酰甘氨酸二肽。由于產物是通過在水中酸化后，低溫下沉淀分離得到，再在水和丙酮混合溶劑中沉淀純化，收率較低(＜50％)且產物通常含有較多的無機鹽和甘氨酸酸酐。

9-芴甲氧羰基(Fmoc-)和叔丁氧羰基的合成災相關專業文獻中已有報道，但普遍存在的問題是產物的收率(＜80％)和純度(含量＜95％)較低，且后處理和產物的分離都不適合于規模化生產。為了開發一種高效的可工業化生產的合成上述三種氨基保護的甘氨酸二肽的工藝，導致了本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種能大批量生產，經濟合理，操作簡單且產品收率和純度均高的氨基保護甘氨酸二肽洐生物的合成方法。

本發明以水和廉價易得的甲醇、四氫呋喃或丙酮為溶劑，碳酸鈉、碳酸鉀或氫氧化鈉為堿，甘氨酸二肽和Fmoc-OSu(芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺)、Boc₂O(二碳酸二叔丁酯)或Ac₂O(乙酸酐)在室溫下反應制得收率和純度分別達到85％～95％和99％以上的N-9-芴甲氧羰基甘氨酸二肽(Fmoc-Gly-Gly-OH)、N-叔丁氧羰基甘氨酸二肽(Boc-Gly-Gly-OH)和N-乙酰基甘氨酸二肽(Ac-Gly-Gly-OH)。

本發明的化學反應方程式如下：

本發明提出的氨基保護甘氨酸二肽洐生物的合成方法，所述氨基保護甘氨酸二肽洐生物為N-9-芴甲氧羰基甘氨酸二肽(Fmoc-Gly-Gly-OH)、N-叔丁氧羰基甘氨酸二肽(Boc-Gly-Gly-OH)和N-乙酰基甘氨酸二肽(Ac-Gly-Gly-OH)。

N-9-芴甲氧羰基甘氨酸二肽的合成方法，具體步驟為：

將固體甘氨酸二肽(H-Gly-Gly-OH)溶于1％～20％(重量)無機堿溶液中，攪拌使甘氨酸二肽固體充分溶解，在20～30℃下，滴加溶于有機溶劑的Fmoc-ONSu溶液，滴加30～60分鐘，滴加結束，攪拌反應1～8小時，加水稀釋，用溶劑萃取，除去過量的Fmoc-OSu，所得水相用濃鹽酸酸化至pH值為0.5～3.5，然后用乙酸乙酯或乙酸異丙酯萃取，所得有機相經水洗、濃縮，析出白色固體，干燥，即得所需產物；其中，甘氨酸二肽與Fmoc-OSu的摩爾比為1.0∶0.9～1.0∶1.2，甘氨酸二肽與無機堿的摩爾比為1.0∶1.2～1.0∶3.0，Fmoc-OSu與有機溶劑的摩爾比為1∶80～1∶160；其中較佳配比為：甘氨酸二肽與Fmoc-OSu的摩爾比為1.0∶1.05，甘氨酸二肽與無機堿的摩爾比為1.0∶1.5。

本發明中，所述有機溶劑為四氫呋喃(THF)、甲醇、乙醇、甲苯、乙腈或丙酮等中任一種，其中THF較佳。所述萃取溶劑為甲苯、乙酸乙酯、乙酸異丙脂或甲基叔丁基醚等中任一種，其中乙酸乙酯最佳；所述無機堿為碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸鋰、氫氧化鉀或氫氧化鈉等中任一種，其中碳酸鉀較佳。

N-叔丁氧羰基甘氨酸二肽的合成方法，具體步驟為：