[發明專利]重組人淀粉樣多肽Aβ42的簡易可溶性表達純化方法無效
| 申請號： | 200910055489.1 | 申請日： | 2009-07-28 |
| 公開（公告）號： | CN101967492A | 公開（公告）日： | 2011-02-09 |
| 發明（設計）人： | 蔡建華;鄧益斌;江騰;周平 | 申請（專利權）人： | 復旦大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12P21/02;C07K14/435;C07K1/22;C07K1/16;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海正旦專利代理有限公司 31200 | 代理人： | 吳桂琴;包兆宜 |
| 地址： | 20043*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組 淀粉 多肽 42 簡易 可溶性 表達 純化 方法 | ||
1.一種重組人淀粉樣多肽Aβ42的簡易可溶性表達純化方法，包括重組載體構建、轉化與篩選、表達與純化，其特征在于，該方法包括如下步驟：
(1)將6His-SUMO-Aβ42融合基因的核苷酸編碼序列插入表達載體的多克隆位點，獲得重組表達載體質粒；
(2)將(1)獲得的重組表達載體質粒轉入大腸桿菌表達菌株，得到能與分子伴侶共表達的Aβ42原核表達菌株；
(3)誘導SUMO-Aβ42融合蛋白和分子伴侶的表達，過柱純化。
2.如權利要求1所述的重組人淀粉樣多肽Aβ42的簡易可溶性表達純化方法，其特征在于，6His-SUMO-Aβ42融合基因是通過化學合成方法獲得。
3.如權利要求1所述的重組人淀粉樣多肽Aβ42的簡易可溶性表達純化方法，其特征在于，所述的表達載體是pET21b。
4.如權利要求1所述的重組人淀粉樣多肽Aβ42的簡易可溶性表達純化方法，其特征在于，所述的大腸桿菌表達菌株是E?coli.BL21(DE3)-groES-groEL-tig。
5.如權利要求1所述的重組人淀粉樣多肽Aβ42的簡易可溶性表達純化方法，其特征在于，所述的分子伴侶是groES-groEL-tig。
6.如權利要求1所述的重組人淀粉樣多肽Aβ42的簡易可溶性表達純化方法，其特征在于，使用異丙基-β-硫代半乳糖苷進行誘導表達。
7.如權利要求1所述的重組人淀粉樣多肽Aβ42的簡易可溶性表達純化方法，其特征在于，所述的過柱純化分為兩步：細胞破碎后先過親和層析柱進行純化，然后再用Superdex?200分子篩柱進一步純化并得到目的多肽Aβ42。
8.一種重組人淀粉樣多肽Aβ42的表達載體，其特征在于，該表達載體是將6His-SUMO-Aβ42融合基因的核苷酸編碼序列插入表達載體pET21b的多克隆位點獲得的。
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