[發(fā)明專利]果汁中耐熱菌的快速檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910055289.6
• 申請日: 2009-07-24
• 公開（公告）號: CN101613739A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈彩鳳;葉建芳;李文俊;趙文超;莫小晶;高紅亮;常忠義
• 申請（專利權(quán)）人: 華東師范大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/28
• 分類號: C12Q1/28;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 上海藍(lán)迪專利事務(wù)所
• 代理人: 徐筱梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品衛(wèi)生檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是一種果汁中耐熱菌的快速檢測方法。

背景技術(shù)

耐熱菌，即酸土環(huán)脂芽抱桿菌(Alicyclobacillus?acidoterrestris)，是1994年從腐敗的蘋果汁中發(fā)現(xiàn)的，它是一種嗜酸、嗜熱的芽孢桿菌，能經(jīng)受酸性條件(pH3.5)和巴氏滅菌而存活，是果汁生產(chǎn)中重要的目標(biāo)控制微生物，它在果汁中大量繁殖，不產(chǎn)生氣體，不改變果汁的外觀，但會代謝產(chǎn)生以愈創(chuàng)木酚為主的化學(xué)物質(zhì)，釋放類似臭襪子的特殊的化學(xué)藥品氣味，有時會使果汁輕微沉淀或出現(xiàn)霧狀渾濁，對果汁感官品質(zhì)產(chǎn)生重大影響，完全破壞了果汁的食用性和商品價值。隨著人們對食品安全問題的日益重視，國際貿(mào)易中對果汁的耐熱菌含量要求很高，耐熱菌的有效控制，首先需要有快速而準(zhǔn)確的檢測方法。

目前常用的耐熱菌檢測方法有常規(guī)的培養(yǎng)檢測法、分子生物學(xué)的DNA分析或16SrRNA序列分析方法。由于耐熱菌生長緩慢，常規(guī)的培養(yǎng)檢測法需要4～5日才能出檢測報(bào)告，分析結(jié)果的滯后使之無法及時指導(dǎo)生產(chǎn)。分子生物學(xué)的DNA分析或16SrRNA序列分析的方法雖然檢測的時間較短，但檢測成本較高，檢測步驟復(fù)雜，一般小型果汁廠家不會采用這種分子生物學(xué)的分析方法對日常生產(chǎn)進(jìn)行質(zhì)量控制。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供的一種果汁中耐熱菌的快速檢測方法，分析工藝簡單，操作方便，它能快速、直觀的檢測果汁飲料中的耐熱菌，檢測費(fèi)用低，對日常生產(chǎn)能有效、及時的進(jìn)行質(zhì)量控制，是一種很有應(yīng)用前景的食品衛(wèi)生檢測方法。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的具體技術(shù)方案是：一種果汁中耐熱菌的快速檢測方法，特點(diǎn)是該方法在果汁中接種耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基，使檢測樣品大量繁殖并迅速產(chǎn)生愈創(chuàng)木酚，利用愈創(chuàng)木酚在含有過氧化物酶的緩沖體系中與過氧化氫的反應(yīng)，快速檢測果汁中的耐熱菌，具體檢測按下述步驟進(jìn)行：

a、將檢測的果汁加熱，加熱溫度為80℃，時間為10min，然后加入含香草酸濃度為100ppm的耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基為培養(yǎng)液，培養(yǎng)液在45℃溫度下，靜止培養(yǎng)24h，加滴的耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基與果汁的體積比為3∶1。

b、在上述培養(yǎng)液中加入濃度為50ppm的鄰苯二甲酸氫鉀溶液、3％的過氧化氫溶液和20U/ml的過氧化物酶溶液混合均勻后，在室溫下反應(yīng)10min，培養(yǎng)液與鄰苯二甲酸氫鉀溶液、過氧化氫溶液和過氧化物酶溶液的體積比分別為2∶1、20∶1和20∶3。

c、用分光光度計(jì)測定或用肉眼觀察上述反應(yīng)的顏色變化，分光光度計(jì)測定OD470≥0.5或肉眼觀察上述反應(yīng)出現(xiàn)紅褐色，則表示檢測的果汁中含有耐熱菌；分光光度計(jì)測定OD470＜0.5或肉眼觀察上述反應(yīng)未出現(xiàn)紅褐色，則表示檢測的果汁中不含有耐熱菌。

所述耐熱菌(BAM)培養(yǎng)基由培養(yǎng)基A液和培養(yǎng)基B液按體積比為1000∶1配制而成，培養(yǎng)基A液和培養(yǎng)基B液為下述組分混合而成，所述物質(zhì)按重量百分比計(jì)：

A液：

CaCl₂.2H2O：????0.20～0.30g????MgSO_4.7H₂O：???0.45～0.55g

(NH₄)₂SO₄：?????0.15～0.25g????酵母粉：???????1.50～2.50g

葡萄糖：????????4.50～5.50g?????KH₂PO₄：????????2.50～3.50g

蒸餾水：????????1000mL

B液：

CaCl.2H₂O：?????0.56～0.76mg????MnSO₄.4H₂O：????0.10～0.20mg

NaMoO₄.2H₂O：???0.25～0.35mg????ZnSO₄.7H2O：????0.10～0.30mg

CoCl₂.6H₂O：????0.10～0.30mg????CuSO₄.5H₂O：????0.10～0.30mg

H₃BO₃：?????????0.05～0.15mg????蒸餾水：????????1.00mL