[發(fā)明專(zhuān)利]一種生產(chǎn)重組高活性錳超氧化物歧化酶的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910055002.X
• 申請(qǐng)日: 2009-07-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101955918A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李素霞;袁勤生;陳車(chē)生;吳梧桐
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華東理工大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N9/02
• 分類(lèi)號(hào): C12N9/02;C12R1/19
• 代理公司: 上海專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜;范征

1.一種生產(chǎn)錳超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)重組表達(dá)錳超氧化物歧化酶，獲得含有可溶性表達(dá)的錳超氧化物歧化酶的細(xì)胞；

(2)破碎步驟(1)獲得的細(xì)胞，離心獲取上清；

(3)將步驟(2)獲得的上清進(jìn)行熱變性，熱變性溫度為75±2℃，熱變性時(shí)間為10±5分鐘；熱變性后冷卻，離心獲取上清；

(4)純化步驟(3)得到的上清，獲得純化的錳超氧化物歧化酶；和

(5)在純化的錳超氧化物歧化酶中加入錳離子，獲得激活的錳超氧化物歧化酶。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，采用超聲破碎細(xì)胞。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，采用大腸桿菌重組表達(dá)錳超氧化物歧化酶。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，熱變性溫度為75±2℃，熱變性時(shí)間為10±2分鐘。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的熱變性在水浴中進(jìn)行。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，熱變性后冷卻至0-4℃。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，采用DEAE-FF陰離子交換樹(shù)脂進(jìn)行純化。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的錳超氧化物歧化酶是人錳超氧化物歧化酶。

9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(5)中，按照摩爾比錳超氧化物歧化酶∶錳離子為1∶(5-100)在純化的錳超氧化物歧化酶中加入錳離子。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，按照摩爾比錳超氧化物歧化酶∶錳離子為1∶(10-30)在純化的錳超氧化物歧化酶中加入錳離子。