[發明專利]一種用于檢測抗膜突蛋白抗體的試劑盒

有效

• 申請號: 200910053508.7
• 申請日: 2009-06-19
• 公開（公告）號: CN101929999A
• 公開（公告）日: 2010-12-29
• 發明（設計）人: 曾小峰;李夢濤;尹雷;艾軍;趙久良;王遷;張玥;黃嵐;楊超文;李春梅;孫宏彬;錢杰
• 申請（專利權）人: 上海科新生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/531;G01N21/31
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 余明偉

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種用于檢測抗膜突蛋白抗體的試劑盒。

背景技術

自身免疫病(autoimmune?diseases，AID)是以自身免疫應答反應導致組織器官損傷和相應功能障礙為主要發病機制的一類疾病。自身免疫疾病有器官特異性和非器官特異性兩大類。而彌漫性結締組織病，簡稱結締組織病(connective?tissue?disease，CTD)屬于非器官特異性自身免疫病。該類疾病往往具有下列共同特點：患者血液中常常出現高滴度的自身抗體和(或)與自身組織成分起反應的致敏淋巴細胞；而患者體內產生的自身抗體或致敏淋巴細胞，與相應的自身組織抗原結合，通過不同的方式造成組織器官的免疫損傷和功能障礙而致病。同時往往自身免疫應答反應的強度與自身免疫病的病情密切相關。因而，結締組織病自身抗體反應的特異性和致病性顯示其在對該疾病的診斷分類、病情評估、以及判斷預后中的價值。

肺臟受累是結締組織病常見的并發癥之一，幾乎所有CTD均有肺臟受累，并且可能為CTD的首發癥狀。該類并發癥起病隱匿，早期診斷困難，并且往往治療效果不佳，是導致CTD患者死亡的重要原因之一。但是，目前臨床中常用的自身抗體檢測指標均不能夠提示CTD相關肺臟受累，并且臨床上沒有一項血清學指標用于診斷結締組織病相關肺臟受累。其中以肺動脈高壓(pulmonary?arterial?hypertension，PAH)和間質性肺病(interstitial?lungdisease，ILD)為甚，目前已經成為風濕免疫科和呼吸內科醫師面臨的一大難題。

CTD肺臟受累(主要包括PAH和ILD)的病因未明，但是血管炎癥是其免疫病理機制之一。許多研究表明，白細胞，內皮細胞和細胞外基質的相互作用在免疫系統的功能中發揮重要作用。這些相互作用對于CTD相關肺臟損傷同樣重要，其中抗內皮細胞的自身抗體(Anti-endothelial?cell?antibodies，AECA)也參與血管損傷。有研究發現在系統性硬化癥中AECA與血沉增快、肺動脈高壓、肺纖維化、乃至肺泡-毛細血管受損密切相關(參見SavageCOS，Pottinger?BE.Vascular?damage?in?Wegener’s?granulomatosis?and?microscopic?polyarteritispresence?of?anti-endothelial?cell?antibodies?and?their?relation?to?anti-neutrophil?cytoplasmanti-bodies.Clin?Exp?Immunol?1991；85：14-19)。近年來一些研究發現，AECA與CTD相關的PAH有較為密切的關系，應用ELISA法研究SSc(systemic?scleroderma，系統性硬皮病)、MCTD(mixed?connective?tissue?disease，混合性結締組織病)及SLE(Systemic?LupusErythematosus，系統性紅斑狼瘡)患者，發現合并PAH組AECA陽性率明顯高于無PAH組，已有研究應用免疫印跡法發現SSc患者AECA-75KD條帶出現的頻率較高，但由于AECA識別的抗原是分子量范圍廣泛的一組蛋白質，在探討其致病機制方面存在很大困難。本發明者以EA.hy926細胞為底物，通過細胞-ELISA法和免疫印跡法檢測患者血清AECA，結果顯示CTD患者AECA陽性率明顯高于IPAH患者、COPD患者，但在CTD患者各不同組之間無明顯差異。通過應用SDS-PAGE、雙向電泳、免疫印跡、質譜分析等一系列方法鑒定得到CTD相關PAH患者的靶抗原(78KD內皮細胞蛋白質)成分為膜突蛋白(membrane-organizing?extension?spike?protein，moesin)；并利用免疫組化方法在人肺微血管內皮細胞水平進行證實。