[發明專利]利用快速蛋白質液相色譜測定木瓜蛋白酶純度的方法有效
| 申請號： | 200910052722.0 | 申請日： | 2009-06-09 |
| 公開（公告）號： | CN101565739A | 公開（公告）日： | 2009-10-28 |
| 發明（設計）人： | 朱利民;蘇賽男;聶華麗 | 申請（專利權）人： | 東華大學 |
| 主分類號： | C12Q1/37 | 分類號： | C12Q1/37;G01N30/02 |
| 代理公司： | 上海泰能知識產權代理事務所 | 代理人： | 黃志達;謝文凱 |
| 地址： | 201620上海市松*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 利用 快速 蛋白質 色譜 測定 木瓜蛋白酶 純度 方法 | ||
1.一種利用快速蛋白質液相色譜測定木瓜蛋白酶純度的方法，包括：
（1）配制流動相
流動相A溶液：0.02~0.1mol/LpH4.5的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液；
流動相B溶液：含1.0~2.0mol/L氯化鈉的0.02~0.1mol/LpH4.5的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液；
（2）制備對照品溶液
將精制木瓜蛋白酶置入50ml容量瓶內，加入流動相A溶液至50ml刻度線定容，搖勻， 至精制木瓜蛋白酶充分溶解，制得精制木瓜蛋白酶對照品溶液；
（3）制備供試樣品溶液
將粗制木瓜粉置于50ml容量瓶中，加入流動相A溶液至50ml刻度線定容，搖勻，經濾紙 過濾，備用；
（4）利用快速蛋白質液相色譜FPLC的離子交換色譜柱進行層析分離，通過計算峰面積 比值的公式：X=（粗制木瓜蛋白酶的峰面積×精制木瓜蛋白酶的濃度）/（精制木瓜蛋白酶的 峰面積×粗制木瓜蛋白酶的濃度）×100%，來計算木瓜蛋白酶的純度；其中色譜條件是離子 交換柱為HiTrapTM?SPXL1ml，流動相A溶液為0.02~0.1mol/L?pH4.5的乙酸-乙酸鈉緩沖溶 液，流動相B溶液為含1.0~2.0mol/L氯化鈉的0.02~0.1mol/LpH4.5的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液， 上樣量為250~500μl，平衡為5~10個柱床，沖洗為5~7個柱床，洗脫梯度為流動相B溶液在 15~25個柱床內由0%線性增加至70%-100%，流速為0.8~1.0ml/min。
2.根據權利要求1所述的一種利用快速蛋白質液相色譜測定木瓜蛋白酶純度的方法，其特征 在于：所述步驟（1）中的流動相A溶液為0.05mol/LpH4.5的乙酸-乙酸鈉緩沖溶液。
3.根據權利要求1所述的一種利用快速蛋白質液相色譜測定木瓜蛋白酶純度的方法，其特征 在于：所述步驟（1）中的流動相B溶液為含2.0mol/L氯化鈉的0.05mol/L?pH4.5的乙酸- 乙酸鈉緩沖溶液。
4.根據權利要求1所述的一種利用快速蛋白質液相色譜測定木瓜蛋白酶純度的方法，其特征 在于：所述步驟（2）中的木瓜蛋白酶的用量為250mg-500mg。
5.根據權利要求1所述的一種利用快速蛋白質液相色譜測定木瓜蛋白酶純度的方法，其特征 在于：所述步驟（3）中的粗制木瓜蛋白酶的用量為300mg-500mg。
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