[發明專利]一種CHO細胞中重組糖蛋白高水平表達的載體系統pGN

有效

• 申請號: 200910052576.1
• 申請日: 2009-06-05
• 公開（公告）號: CN101906436A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發明（設計）人: 盛澤林
• 申請（專利權）人: 蘇州澤璟生物制藥有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;C12P21/02
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 徐迅

1.一種可用于在動物細胞內表達外源蛋白的表達載體，其特征在于，所述的載體含有表達外源蛋白的表達盒，所述的表達盒從5’至3’依次具有以下元件：

(a)第一啟動子，所述的第一啟動子選自：CMV啟動子；

(b)多克隆位點以及任選的位于多克隆位點之中、之前或之后的外源蛋白的編碼序列；

(c)第一polyA序列，所述的第一polyA序列選自：牛生長因子polyA(bovine?growth?factor?hormone?polyA)；

(d)第二啟動子，所述的第二啟動子選自：β-肌動蛋白啟動子或SV40早期啟動子；

(e)選擇標記基因，所述的選擇標記基因選自：DHFR基因；和

(f)第二polyA信號序列，所述的第二polyA信號序列選自：SV40?polyA信號序列。

2.如權利要求1所述的表達載體，所述的外源蛋白是β干擾素。

3.如權利要求1所述的表達載體，所述的β干擾素來源于人。

4.如權利要求1所述的表達載體，所述的β干擾素具有天然序列、變異序列或重組序列；

更佳地，所述的β干擾素具有SEQ?ID?NO：1所述的核苷酸序列。

5.如權利要求1所述的表達載體，所述的標記基因是二氫葉酸還原酶基因。

6.如權利要求1所述的表達載體，所述的標記基因具有SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列。

7.一種由權利要求1-6中任一所述的表達載體所轉化的宿主細胞。

8.如權利要求7所述的宿主細胞，其特征在于，所述的宿主細胞選自：中國倉鼠卵巢細胞(CHO)、小鼠細胞(NIH/3T3)、猴細胞(COS-1細胞)或人細胞(Hela細胞)。

9.如權利要求7所述的宿主細胞，其特征在于，所述的宿主細胞中具有3-20個所述的表達載體、3-20個所述的表達盒、或、3-20個拷貝的所述外源基因的編碼序列；和/或

所述的宿主細胞表達外源蛋白的速度≥1.5pg/細胞/天，較佳地≥2.0pg/細胞/天，更佳地≥3.0pg/細胞/天，更佳地≥4.0pg/細胞/天，≥5.0pg/細胞/天。

10.一種制備外源蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包括：

(a)培養權利要求7所述的宿主細胞，從而表達所述的外源蛋白；

(b)分離出表達的所述的外源蛋白。