[發(fā)明專利]瓜黑星病菌的檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910052368.1
• 申請日: 2009-06-02
• 公開（公告）號: CN101906465A
• 公開（公告）日: 2010-12-08
• 發(fā)明（設計）人: 王偉;高永洋;王楠;高觀朋;唐建輝
• 申請（專利權）人: 華東理工大學;上海偉智生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12R1/77;C12R1/645
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 范征

1.一種用于特異性檢測樣品中瓜黑星病菌的組合物，其特征在于它，所述組合物包括一對特異性引物，所述特異性引物對的序列分別是SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的序列。

2.一種用于特異性檢測樣品中瓜黑星病菌的PCR檢測試劑盒，其特征在于它，所述試劑盒包含PCR反應體系，所述反應體系包含一對特異性引物，所述特異性引物對的序列分別是SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的序列。

3.一種檢測樣品中瓜黑星病菌的方法，其特征在于它，該方法包括以下步驟，

a)用權利要求2所述的PCR檢測試劑盒對所述樣品進行PCR擴增，獲得PCR擴增產物；

b)測定步驟a)獲得的PCR擴增產物的大小，若產物中存在190bp的DNA片段，則表明所述樣品中瓜黑星病菌。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟a)的擴增包括在94℃預變性5分鐘；94℃變性45秒，60℃退火1分鐘，72℃延伸1分鐘，共32個循環(huán)，最后72℃延伸7分鐘。

5.如權利要求3所述的方法，其特征在于它，所述樣品是瓜組織或其DNA提取物，所述瓜選自西瓜、甜瓜、黃瓜、冬瓜、瓤瓜、苦瓜、南瓜、西葫蘆和絲瓜。

6.一種用于同時特異性檢測樣品中瓜枯萎病菌、瓜蔓枯病菌和瓜黑星病菌的組合物，其特征在于它，所述組合物包括三對特異性引物，其中，第一引物對的序列是SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的序列，第二引物對的序列是SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示的序列，第三引物對的序列是SEQ?ID?NO：5和SEQ?ID?NO：6所示的序列。

7.一種用于同時特異性檢測樣品中瓜枯萎病菌、瓜蔓枯病菌和瓜黑星病菌的PCR檢測試劑盒，其特征在于它，所述試劑盒包含PCR反應體系，所述反應體系包含三對特異性引物，其中，第一引物對的序列是SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的序列，第二引物對的序列是SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示的序列，第三引物對的序列是SEQ?ID?NO：5和SEQ?ID?NO：6所示的序列。

8.一種同時檢測樣品中瓜枯萎病菌、瓜蔓枯病菌和瓜黑星病菌的方法，其特征在于它，該方法包括以下步驟，

a)用權利要求6所述的PCR檢測試劑盒對所述樣品進行PCR擴增，獲得PCR擴增產物；

b)測定步驟a)獲得的PCR擴增產物的大小，若產物中存在190bp的DNA片段，則表明所述樣品中瓜黑星病菌；若產物中存在327bp的DNA片段，則表明所述樣品中瓜枯萎病菌；若產物中存在442bp的DNA片段，則表明所述樣品中瓜蔓枯病菌。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述步驟a)的擴增包括在94℃預變性6分鐘，進入循環(huán)，94℃變性30秒，46℃退火1分鐘，72℃延伸2分鐘，共40個循環(huán)，最后72℃延伸10分鐘。

10.如權利要求8所述的方法，其特征在于它，所述樣品是瓜組織或其DNA提取物，所述瓜選自西瓜、甜瓜、黃瓜、冬瓜、瓤瓜、苦瓜、南瓜、西葫蘆和絲瓜。