[發明專利]一種鑒定目標核酸的方法

有效

• 申請號: 200910052126.2
• 申請日: 2009-05-27
• 公開（公告）號: CN101899497A
• 公開（公告）日: 2010-12-01
• 發明（設計）人: 華紹炳
• 申請（專利權）人: 杭州德同生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 范征;陳靜

技術領域

本發明屬于生物技術領域，更具體地，本發明涉及鑒定目標核酸的方法及試劑盒。

背景技術

ELISA方法是抗體應用技術中最常見的方法之一(BS?Dunbar?&?SM?Skinner(1985)“Preparation?of?monoclonal?antibodies”.In：“Methods?in?Enzymology?Vol.182，Guide?to?Protein?Purification”.Ed.MP?Deutscher，pp.670-679，AcademicPress；D?Catty?&?C?Raykundalia(1989)“ELISA?and?related?enzymeimmunoassays”.In：“Antibodies：A?practical?approach.vol.2”Ed.D?Catty，pp.97-154.IRL?Press)。這些方法中，Sandwich?ELISA是ELISA方法的一種變形，即第一種抗體首先包被于固定相上，清洗后，抗原(通常是蛋白質)結合于第一種抗體，再清洗后，第二種抗體結合于抗原上，其操作流程通常如圖1所示。第二種抗體可以偶聯有酶進行酶活性檢測(圖1虛線途徑)，或者用抗第二種抗體的第三抗體與酶的偶聯物進行檢測酶活性(圖1實線途徑)。

現有技術中，用ELISA的方法研究蛋白質的技術已非常成熟。過去數十年來，ELISA的方法無實質性變化(GC?Howard?&?DR?Bethell(eds.)(2002)“Basic?methods?in?antibody?production?and?characterization.”CRC?Press；CF?BarbasIII，DR?Burton，JK?Scott?&?GJ?Silverman(eds.)(2001)“Phage?Display：ALaboratory?Manual.”Cold?Spring?Harbor?Laboratory?Press)。

一種抗體與其蛋白質抗原相對應的抗原決定簇(epitope)相結合。本領域人員均了解，一種抗體只能與一個抗原決定簇位點相結合。一般情況下，常規抗原-抗體的結合檢測(如Sandwich?ELISA)很難將抗原先與抗體結合后再進行捕獲測定而獲得好的結果，特別是在應用多克隆抗體的情況下。因此，通常本領域人員都是將抗原先用一種抗體捕獲后，洗滌后再用另一種抗體進行檢測，兩個抗體結合步驟分開進行。

作為抗原，DNA-RNA核酸雙鏈雜交體是一種與蛋白質抗原存在顯著差別的物質?，F有技術中，均采用了類似ELISA方法捕獲和檢測DNA-RNA雙鏈雜交體，這些方法的步驟基本上與世界專利PCT號WO93/10263所公布說明的雜交捕獲法相一致，沒有任何已發表的關于對其進行簡化或優化操作的文獻。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鑒定目標核酸的方法。

本發明的另一目的在于提供鑒定目標核酸的試劑盒。

在本發明的第一方面，提供一種鑒定目標核酸的方法，所述方法依次包括：

(a)將待測的核酸樣本解鏈處理，得到單鏈核酸樣本；

(b)將特異性識別目標核酸的探針與步驟(a)獲得的單鏈核酸樣本雜交，其中，當目標核酸是DNA時，所述探針是RNA；當目標核酸是RNA時，所述探針是DNA；得到雙鏈雜交體樣本；

(c)將步驟(b)獲得的雙鏈雜交體捕獲到固相載體上，測定被捕獲的雜交體；從而得知目標核酸的存在與否或存在量。

在一個優選例中，將雙鏈雜交體捕獲到固相載體上與測定被捕獲的雜交體同步進行，也即所述的雙鏈雜交體捕獲到固相載體上與測定被捕獲的雜交體兩個步驟之間不經過洗滌步驟。

在另一優選例中，所述的目標核酸是DNA。

在另一優選例中，所述的目標核酸長度是200-50000bp，優選500-30000bp；所述的探針長度是200-50000bp，優選500-30000bp。

在另一優選例中，步驟(c)中，將雙鏈雜交體捕獲到固相載體上包括：將雙鏈雜交體樣本、檢測抗體加樣(優選同時加樣)到包被有包被抗體的固相載體上，在固相載體上形成包被抗體-雙鏈雜交體-檢測抗體三元復合物；其中，所述的檢測抗體是抗所述雙鏈雜交體的抗體，其攜帶有可檢測信號；所述的包被抗體是抗所述雙鏈雜交體的抗體。