[發(fā)明專利]黃芪均多糖的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910050771.0
• 申請日: 2009-05-07
• 公開（公告）號: CN101555290A
• 公開（公告）日: 2009-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙愛華;賈偉;牟魯霞
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 上海交達(dá)專利事務(wù)所
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種中藥技術(shù)領(lǐng)域的制備方法，特別涉及一種黃芪均多糖的制備方法。

背景技術(shù)

多糖是一類天然高分子化合物，是由醛糖或酮糖通過甙鍵連接在一起的多聚物。自上世紀(jì)70年代發(fā)現(xiàn)多糖及糖復(fù)合物參與細(xì)胞的各種生命現(xiàn)象的調(diào)節(jié)以來，人們不斷發(fā)現(xiàn)多糖具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、抗病毒、降血脂、抗凝血等多種生物活性。并且由于多糖沒有明顯的毒副作用，對多糖生物資源的開發(fā)利用和研究日益活躍，成為天然藥物、生物化學(xué)、生命科學(xué)的研究熱點(diǎn)。

黃芪為豆科植物膜莢黃芪Astragalus?membranaceus(Fisch.)Bge.或蒙古黃芪Astragalus?membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge)Hsiao的干燥根，素以“補(bǔ)氣諸藥之最”著稱，是一種常用的扶正中藥。性味甘、微溫，歸脾、肺經(jīng)，具有補(bǔ)氣固表、利尿托毒、排膿、斂瘡生肌等功效。黃芪含有多糖、蛋白質(zhì)、生物堿、氨基酸、黃酮類、苷類、微量元素等多種生物活性物質(zhì)，其中黃芪多糖(Astragalus?polysaccharides，APS)是黃芪主要的生物活性成分之一，具有免疫調(diào)節(jié)、降血糖、抗腫瘤、促進(jìn)骨髓造血干細(xì)胞增殖和雙向調(diào)節(jié)血糖等作用。

經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)的文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，中國專利CN101020721A公布了一種制備高純度粗黃芪多糖的方法，恒溫微波提取后離心，上清液活性炭脫色，醇沉，凝膠過濾層析即得；中國專利CN101029086A則公布了一種聯(lián)合應(yīng)用微波提取、微濾、超濾和醇沉技術(shù)來制備黃芪多糖的方法。尚未進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)分子量明確、多糖組成清楚的黃芪均多糖制備方法的公開文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種黃芪均多糖的制備方法。本發(fā)明的方法得到的多糖平均分子量約為9000，完全酸水解后只含有葡萄糖一種單糖單元；本發(fā)明的方法簡單快速，成本低廉。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的，本發(fā)明包括如下步驟：

步驟一，取黃芪粗粉，用3倍量體積分?jǐn)?shù)的乙醇回流脫脂1.5h，其中乙醇為體積分?jǐn)?shù)為95％的乙醇；過濾，藥渣中加入為藥渣6～12倍量體積分?jǐn)?shù)的水回流提取90min，過濾，重復(fù)提取2次，合并濾液；

步驟二，取濾液，濃縮至濾液體積的1/5～1/10，得到濃縮液，在濃縮液中加入體積分?jǐn)?shù)為95％的乙醇，攪拌，直至溶液中的乙醇的體積分?jǐn)?shù)為50％～80％，沉淀，靜置過夜，離心或過濾，收集沉淀物，洗滌，60℃真空干燥，即得黃芪粗多糖；

步驟三，利用步驟二得到的黃芪粗多糖制備20g·L^-1的黃芪粗多糖水溶液，按照黃芪粗多糖與胃蛋白酶的摩爾比為1∶1～1∶5的比例向黃芪粗多糖水溶液中加入胃蛋白酶，37℃下酶解3～7小時，煮沸10min，離心，得到上清液；

步驟四，按上清液與Sevage試劑體積比為4∶1～6∶1的比例，在上清液中加入Sevage試劑，其中Sevage試劑具體為：氯仿與正丁醇按體積比為4∶1配制而成；振搖萃取，離心并收集上層水相溶液，重復(fù)操作3～6次；

步驟五，在步驟四得到的水相溶液中加入二乙氨基乙基纖維素，使二乙氨基乙基在水相溶液中的重量百分比為0.5％～1.5％，煮沸10～20min，過濾，得到濾液，將濾液濃縮至步驟三中的黃芪粗多糖水溶液體積的1/10，濃縮液用截流分子量為3000的透析袋進(jìn)行透析，透析3d，在透析后的溶液中加入體積分?jǐn)?shù)為95％的乙醇，直至溶液中乙醇的體積分?jǐn)?shù)為80％，沉淀，靜置過夜，離心或過濾，收集沉淀物，洗滌，60℃真空干燥，即得精制黃芪多糖；

步驟六，取精制黃芪多糖，超聲水溶解，二乙氨基乙基弱陰性離子交換柱層析分離，去離子水洗脫，流速為0.8～1.2mL·min^-1，苯酚硫酸法檢測，合并490nm處有吸收的部分，濃縮，冷凍干燥，得到白色固體物；

步驟七，將步驟六中得到的白色固體物加水溶解，經(jīng)凝膠柱層析純化分離，去離子水洗脫，流速為8～10mL·h^-1，HPLC-ELSD監(jiān)測，根據(jù)液相圖譜合并保留時間最長的對稱峰部分，濃縮，冷凍干燥，即得黃芪均多糖。

步驟二和步驟五中，所述洗滌為，先用無水乙醇洗一次，再用丙酮洗一次，重復(fù)兩次。

步驟三中，所述胃蛋白酶酶活力≥1200U/g。

所述柱層析用水為去離子水。