[發明專利]黃芪均多糖的制備方法

無效

• 申請號: 200910050771.0
• 申請日: 2009-05-07
• 公開（公告）號: CN101555290A
• 公開（公告）日: 2009-10-14
• 發明（設計）人: 趙愛華;賈偉;牟魯霞
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 上海交達專利事務所
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

1.一種黃芪均多糖的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，取黃芪粗粉，用3倍量體積份數的乙醇回流脫脂1.5h，其中乙醇為體積分數為95％的乙醇；過濾，藥渣中加入為藥渣6～12倍量體積份數的水回流提取90min，過濾，重復提取2次，合并濾液；

步驟二，取濾液，濃縮至濾液體積的1/5～1/10，得到濃縮液，在濃縮液中加入體積分數為95％的乙醇，攪拌，直至溶液中的乙醇的體積分數為50％～80％，沉淀，靜置過夜，離心或過濾，收集沉淀物，洗滌，60℃真空干燥，即得黃芪粗多糖；

步驟三，利用步驟二得到的黃芪粗多糖制備20g·L^-1的黃芪粗多糖水溶液，按照黃芪粗多糖與胃蛋白酶的摩爾比為1∶1～1∶5的比例向黃芪粗多糖水溶液中加入胃蛋白酶，37℃下酶解3～7小時，煮沸10min，離心，得到上清液；

步驟四，按上清液與Sevage試劑體積比為4∶1～6∶1的比例，在上清液中加入Sevage試劑，其中Sevage試劑具體為：氯仿與正丁醇按體積比為4∶1配制而成；振搖萃取，離心并收集上層水相溶液，重復操作3～6次；

步驟五，在步驟四得到的水相溶液中加入二乙氨基乙基纖維素，使二乙氨基乙基在水相溶液中的重量百分比為0.5％～1.5％，煮沸10～20min，過濾，得到濾液，將濾液濃縮至步驟三中的黃芪粗多糖水溶液體積的1/10，濃縮液用截流分子量為3000的透析袋進行透析，透析3d，在透析后的溶液中加入體積分數為95％的乙醇，直至溶液中乙醇的體積分數為80％，沉淀，靜置過夜，離心或過濾，收集沉淀物，洗滌，60℃真空干燥，即得精制黃芪多糖；

步驟六，取精制黃芪多糖，超聲水溶解，二乙氨基乙基弱陰性離子交換柱層析分離，去離子水洗脫，流速為0.8～1.2mL·min^-1，苯酚硫酸法檢測，合并490nm處有吸收的部分，濃縮，冷凍干燥，得到白色固體物；

步驟七，將步驟六中得到的白色固體物加水溶解，經凝膠柱層析純化分離，去離子水洗脫，流速為8～10mL·h^-1，HPLC-ELSD監測，根據液相圖譜合并保留時間最長的對稱峰部分，濃縮，冷凍干燥，即得黃芪均多糖。

2.根據權利要求1所述的黃芪均多糖的制備方法，其特征是，步驟二和步驟五中，所述洗滌為，先用無水乙醇洗一次，再用丙酮洗一次，重復兩次。

3.根據權利要求1所述的黃芪均多糖的制備方法，其特征是，步驟三中，所述胃蛋白酶酶活力≥1200U/g。

4.根據權利要求1所述的黃芪均多糖的制備方法，其特征是，所述柱層析的用水為去離子水。