[發明專利]一種檢測囊型包蟲病的免疫層析試條及其制備方法

無效

• 申請號: 200910050688.3
• 申請日: 2009-05-06
• 公開（公告）號: CN101881773A
• 公開（公告）日: 2010-11-10
• 發明（設計）人: 高春花;汪俊云;楊玥濤;石鋒;朱慧慧;王立英
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心寄生蟲病預防控制所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/552
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1.一種用于免疫學方法檢測囊型包蟲病的試劑，包括以下組分：

(1)囊型包蟲病的天然抗原；(2)抗人IgG的標記抗體；

所述的囊型包蟲病天然抗原按如下方法制備：取新鮮羊肝包囊液，以3000r/min離心20min，吸上清液入透析袋，用PBS溶液于4℃下透析過夜，將透析過夜的包囊液6000r/min離心20min，取上清，棄沉淀，即制得囊型包蟲病天然抗原；

所述的抗人IgG的標記抗體是利用人IgG免疫鼠、兔、羊或者其他動物獲得的多抗或單克隆抗體，所說的標記包括酶標記、膠體金標記或者其他標記。

2.根據權利要求1的檢測包蟲病的試劑，其特征在于，其中所述的標記抗體是鼠抗人IgG的單克隆抗體。

3.根據權利要求1的檢測囊型包蟲病的試劑，其特征在于，其中所述的標記抗體是鼠抗人IgG4的單克隆抗體。

4.一種快速檢測囊型包蟲病的免疫層析試條，包括以下組分：

樣品墊、緊密連接于所述樣品墊的含有膠體金標記抗體的金標墊、與所述金標墊緊密連接的纖維素膜和緊密連接于所述纖維素膜另一端的吸水墊；所述纖維素膜上遠離金標墊的一端設置質控線，在質控線和金標墊之間的纖維素膜上設置一條檢測線；

所述的檢測線由囊型包蟲病的天然抗原組成，所述的囊型包蟲病的天然抗原為來源于羊肝棘球蚴包囊液的上清液；所述的膠體金標記抗體為以人IgG為抗原免疫動物獲得的抗體；所述的質控線由特異性結合膠體金標記抗體的抗抗體組成。

5.根據權利要求4的檢測囊型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于，所述金標墊的膠體金標記抗體為以人IgG作為抗原免疫小鼠獲得的單克隆抗體，所述質控線為羊抗鼠抗抗體。

6.根據權利要求5的檢測囊型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于，羊肝棘球蚴包囊液的上清液蛋白濃度為1～10mg/mL，噴涂量為10μL/cm²；膠體金標記抗體濃度以蛋白濃度計為1～5mg/15～20mL；羊抗鼠抗抗體溶液濃度為0.1～5mg/mL，噴涂量為10μL/cm²。

7.根據權利要求4-6中的任一項的檢測囊型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于，所述支持檢測線和質控線的纖維素膜選自硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜；所述支持膠體金標記抗體的金標墊選自玻璃纖維膜或聚脂膜；所述樣品墊選自濾血膜、玻璃纖維或吸水紙，其中濾血膜是棉籽絨和纖維素的混合物或者玻璃纖維和纖維素混合物；所述吸水墊為吸水紙。

8.根據權利要求7的檢測囊型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于，其中所述的纖維素膜寬度為2.5～3.0mm；吸水墊寬度為20～40mm，厚度為0.1～0.2mm；金標墊的寬度為5～10mm；樣品墊寬度為20～40mm。

9.根據權利要求8的檢測囊型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于，所述免疫層析試條背面設置一個起支撐作用的背板，背板材料為塑料。

10.根據權利要求9的檢測囊型包蟲病的免疫層析試條，其特征在于，將所述帶有背板的免疫層析試條裝入一個盒體中，該盒體對應于樣品墊的部位設有檢測孔，對應于檢測線和質控線的部位設有觀測窗。

11.根據權利要求4的檢測囊型包蟲病的免疫層析試條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)制備囊型包蟲病的天然抗原，將來源于羊肝棘球蚴包囊液的上清液蛋白濃度調整到1～10mg/mL；

制備膠體金標記抗體，將1～5mg以人IgG為抗原免疫動物獲得的抗體加入100mL膠體金溶液，離心取沉淀，復溶到15～20mL；

制備與膠體金標記抗體特異結合的抗抗體，將溶液濃度調整到0.1～5mg/mL；

(2)將囊型包蟲病的天然抗原溶液噴涂到所述纖維素膜上形成檢測線，將能與膠體金標記抗體特異結合的抗抗體溶液噴涂到所述纖維素膜的另一區域形成質控線；

將玻璃纖維膜或聚脂膜浸入膠體金標記抗體溶液，制備金標墊；

(3)將吸水墊粘貼在所述纖維素膜的遠離檢測線的一端，將金標墊粘貼在纖維素膜的靠近檢測線的一端，將樣品墊粘貼于金標墊上與所述纖維素膜相對的一端，得到檢測囊型包蟲病的免疫層析試條。

12.根據權利要求11的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)制備囊型包蟲病的天然抗原，將來源于羊肝棘球蚴包囊液的上清液蛋白濃度調整到1～10mg/mL；

制備膠體金標記抗體，將1～5mg以人IgG為抗原免疫動物獲得的抗體加入100mL膠體金溶液，離心取沉淀，復溶到15～20mL，加入蔗糖使蔗糖的終濃度為2％～10％；

制備與膠體金標記抗體特異結合的抗抗體，將溶液濃度調整到0.1～5mg/mL；

(2)將囊型包蟲病的天然抗原溶液噴到所述纖維素膜上形成檢測線，將能與膠體金標記抗體特異結合的抗抗體溶液噴到所述纖維素膜的另一區域形成質控線；將噴涂有檢測線、質控線的纖維膜在37℃下干燥0.5～2小時；

將玻璃纖維膜或聚脂膜浸入膠體金標記抗體溶液，制備金標墊；將金標墊在37℃下干燥0.5小時；

(3)將吸水墊粘貼在所述纖維素膜的遠離檢測線的一端，將金標墊粘貼在纖維素膜的靠近檢測線的一端，將樣品墊粘貼于金標墊上與所述纖維素膜相對的一端，得到檢測囊型包蟲病的免疫層析試條。