[發明專利]沼濕草的組織培養方法

無效

• 申請號: 200910049979.0
• 申請日: 2009-04-24
• 公開（公告）號: CN101869071A
• 公開（公告）日: 2010-10-27
• 發明（設計）人: 陳建華;黃建榮;沈勤
• 申請（專利權）人: 上海上房園林植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 林君如

1.沼濕草的組織培養方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)無菌材料的獲得

在春季取萌發的沼濕草的小芽，除去葉片，用自來水沖洗1-3h，再于超凈工作臺上，依次利用質量濃度為70-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無菌水沖洗4-6次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分后，將小球莖切成0.5-2cm的帶腋芽的節段，節段接種于腋芽誘導培養基上；

(2)芽的分化和增殖

節段接種于腋芽誘導培養基上1-3周后，腋芽部位開始膨大，出現綠色突起，3-4周后節段上可以看見芽分生組織，再培養1-2個月，芽可以長到3-4cm長，將不定芽切下移入不定芽增殖培養基中進行增殖培養，不定芽基部的愈傷組織較多，但不定芽仍增殖較快，生長發育良好，并無玻璃化等不良現象；

(3)不定芽壯苗培養

在不定芽增殖培養基里誘導出的不定芽處于矮化狀態，將不定芽分成小叢，然后將分成小叢的不定芽轉至壯苗培養基上，不定芽迅速伸長，20-30天后可以長到3-4cm；

(4)生根培養

取3-4cm的不定芽小植株，轉接入生根培養基中誘導生根，8-15天后小植株幼苗的基部分化出白色的根原基，25-35天后可以長至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100％；

(5)煉苗與移栽

在生根培養15-25天，根系長至0.5-2cm時，選擇根系發達、生長健壯的無菌幼苗，于室內開瓶煉苗1-3天，然后將苗取出，洗凈其根部的瓊脂，栽于溫室內的苗床中馴化25-40天，即可移栽室外，并給予肥水管理，移栽成活率為90-100％。

2.根據權利要求1所述的沼濕草的組織培養方法，其特征在于，所述的腋芽誘導培養基包括MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.05-0.2mg/L。

3.根據權利要求1所述的沼濕草的組織培養方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培養基包括MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.05-0.2mg/L。

4.根據權利要求3所述的沼濕草的組織培養方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培養基優選MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L。

5.根據權利要求1所述的沼濕草的組織培養方法，其特征在于，所述的壯苗培養基包括MS+6-BA0.05-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L。

6.根據權利要求5所述的沼濕草的組織培養方法，其特征在于，所述的壯苗培養基優選MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。

7.根據權利要求1所述的沼濕草的組織培養方法，其特征在于，所述的生根培養基包括MS+NAA0.1-0.3mg/L。

8.根據權利要求7所述的沼濕草的組織培養方法，其特征在于，所述的生根培養基優選MS+NAA0.1mg/L。

9.根據權利要求2或3或5或7所述的沼濕草的組織培養方法，其特征在于，所述的培養基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養基pH5.5-6.0，培養溫度24-26℃，光照1500-2500lx。