[發明專利]含色素上皮衍生因子的復合物及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 200910049904.2
• 申請日: 2009-04-24
• 公開（公告）號: CN101544696A
• 公開（公告）日: 2009-09-30
• 發明（設計）人: 于昊燕;焦春;柯靜婷
• 申請（專利權）人: 焦春;于昊燕
• 主分類號: C07K17/08
• 分類號: C07K17/08;C07K19/00;A61K9/16;A61K47/34;A61K38/17;A61K47/48;A61P35/00;A61P9/10;A61P27/02;G01N33/68
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技術領域

本發明涉及一種含色素上皮衍生因子(Pigment?Epithelium-Derived?Factor，PEDF)的復合物，尤其涉及一種能延長PEDF體內半衰期的復合物及其制備方法和應用。

背景技術

新生血管生成是指在原有的血管上生成新的毛細血管。腫瘤的生長和遷移依賴于新生血管的生成，因此抑制新生血管的發生成為一種抗腫瘤治療的新的手段。(Folkman?J.N?Engl?J?Med?1971；285：1182-1186)。

色素上皮衍生因子(PEDF)是人和動物眼中天然存在的一種糖蛋白，分子量為46KD，具有2個結構域：N端的神經營養區域和C端的絲氨酸蛋白酶抑制超基因家族反應環。DNA序列分析顯示PEDF屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑基因超家族，但它不具有抑制蛋白酶的活性。PEDF最初是Tombran-Tink等于1989年從胎兒視網膜色素上皮細胞培養液中分離出來的，由此得名。它可以誘導體外培養的視網膜母細胞瘤細胞系Y79Rb神經元分化。在人胚胎發育到17周的RPE細胞就已經具有這種活性，PEDF被認為是影響早期神經元發育的一個候補因子。1999年Dawson等首次發現PEDF具有很強的抑制血管的作用，可能是維持角膜、玻璃體等眼內組織無血管形成的主要原因，在玻璃體內是主要的血管增生抑制劑(Dawson?DW，Volpert?OV，Science?1999；285(5425)245-248)。

PEDF具有抑制病理性血管新生和神經營養雙重生物學功能，既可以有效地抑制血管新生，又能有效地保護神經元，為眼部新生血管性疾病的治療提供了新的思路。PEDF將成為控制糖尿病視網膜病變、早產兒視網膜病變、年齡相關性黃斑變性等疾病很有潛力的藥物。PEDF可特異性地作用在腫瘤新生血管豐富的區域，而對正常存在的血管沒有作用，PEDF這種對新生血管內皮細胞增殖和遷移的特異性抑制，使其成為一種潛在的新生血管抑制劑類抗腫瘤藥物。

但是，PEDF蛋白質藥物在給藥后其體內半衰期短，除了體內蛋白降解作用外，會通過腎小球過濾途徑從體內被排除，在有些情況下，因結合特異性抗體而被清除或失活。為維持體內有效的治療濃度，就需要頻繁地注射給藥，這種治療方式雖然可以達到治療目的，但給病人帶來不便與痛苦，且增加了用藥成本。

發明內容

本發明要解決PEDF在體內半衰期短的技術問題，提供一種含色素上皮衍生因子的復合物。此外，還需要提供含色素上皮衍生因子的復合物的制備方法和應用。

為了解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

在本發明的一個方面，提供了一種含色素上皮衍生因子的復合物，所述色素上皮衍生因子與聚烯醇類化合物或免疫球蛋白Fc片斷偶聯。

所述聚烯醇類化合物選自聚乙二醇(Polyethylene?Glycol，PEG)、聚乙稀醇、聚丙烯醇、聚丁烯醇或它們的衍生物，優選的，所述聚烯醇類化合物為聚乙二醇，更優選的，該聚乙二醇選自單甲氧基聚乙二醇丙醛或單甲氧基聚乙二醇丁醛。聚乙二醇是線形或分叉，平均分子量為1,000～100,000道爾頓之間，優選10,000～40,000道爾頓之間，更優選分子量為20,000Da和40,000Da的聚乙二醇。

所述復合物中，一個色素上皮衍生因子與一個或多個聚乙二醇分子偶聯，該偶聯的位點為色素上皮衍生因子的N端α氨基、賴氨酸殘基側鏈的ε氨基、半胱氨酸殘基側鏈的巰基、天冬氨酸殘基側鏈的羧基、谷氨酸殘基側鏈的羧基中的一個或其多個組合。

優選的，所述復合物中，一個色素上皮衍生因子與一個聚乙二醇分子偶聯，該偶聯的位點為色素上皮衍生因子的N端α氨基。色素上皮衍生因子N末端單一位點的修飾，使修飾后的色素上皮衍生因子分子結構均一，更有利于藥物開發的應用。

所述復合物中，一個色素上皮衍生因子和一個或多個免疫球蛋白Fc片斷偶聯，該偶聯可以是融合表達得到，也可以是通過體外蛋白偶聯得到。優選的，該免疫球蛋白Fc片斷為人免疫球蛋白IgG中的Fc片斷。

在本發明的另一方面，提供了一種包含上述復合物的緩釋制劑，該緩釋制劑的緩釋材料選自微膠囊、水凝膠、微球、微型滲透泵或脂質體。該緩釋制劑在保留色素上皮衍生因子生物學活性的同時，能夠依靠緩釋進一步延長色素上皮衍生因子的體內半衰期。優選的方案為用聚乳酸-聚羥基乙酸共聚物微球對PEDF進行包埋，達到體內緩釋PEDF的目的。