[發(fā)明專利]比色法測定奶粉中游離L-羥脯氨酸

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910049666.5
• 申請日: 2009-04-21
• 公開（公告）號: CN101871893A
• 公開（公告）日: 2010-10-27
• 發(fā)明（設計）人: 陳延霞
• 申請（專利權）人: 陳延霞
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及奶粉中游離L-羥脯氨酸含量的測定。

背景技術

L-羥脯氨酸(L-HYP)是人體膠原蛋白的組成成分，但不屬于20種常見的氨基酸。我國最近出臺的《食品添加劑使用衛(wèi)生標準2760-2007》并不允許其作為食品添加劑添加到各類食品中。但一些企業(yè)為了追求利潤，以次充好，使自己產品的蛋白質含量達標而在生產奶粉利含乳飲料過程中非法添加了游離L-HYP，蒙混通過質量監(jiān)管部門的監(jiān)督檢查而在市場上銷售，這種劣質的乳制品將嚴重危及到人體健康。L-HYP的測定主要包括比色法、氨基酸分析儀法和電泳法等，其中以比色法最為常用。我國于1990年將比色法定為《肉與肉制品L-羥脯氨酸含量測定》的國家標準方法，并且一直沿用至今。但遺憾的是，目前還未出現(xiàn)對奶粉中游離L-HYP進行測定的方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明專利的目的在于提供一種快速測定奶粉中游離L-羥脯氨酸含量的方法。

本發(fā)明專利包括對奶粉中蛋白質進行沉淀處理，然后采用經(jīng)典的比色法對其中的游離L-HYP進行測定獲得相關結果。

作為本發(fā)明專利的特征，蛋白質沉淀劑為219g/L乙酸鋅和106g/L亞鐵氰化鉀。

作為本發(fā)明專利的特征，顯色劑為對二氨基苯甲醛。

本發(fā)明專利所建立的方法，實驗的精密度在2.6％-4.9％之間，完全可以滿足定量分析的需要，表明用此方法測定奶粉中的游離L-HYP是可行的。此外，實驗操作簡單、快捷、并且檢測成本低。

具體實施方式

準備好主要儀器，包括紫外可見分光光度計、電熱恒溫水浴鍋和電子天平。稱取L-HYP標準品若干克待用。蛋白質沉淀劑包括219g/L乙酸鋅(稱取219g醋酸鋅，加30ml冰醋酸，溶于水并定容至1000ml)和106g/L亞鐵氰化鉀(稱取106g亞鐵氰化鉀溶于水，并定容至1000mL)。緩沖溶液(pH?6)：稱取50.0g檸檬酸，26.3g氫氧化鈉和146.1g乙酸鈉，蒸餾水溶解，定容至1000mL。再加入200mL蒸餾水和300mL正丙醇，混勻，保存。氯胺T溶液(此溶液現(xiàn)用現(xiàn)配)：稱取1.41g氯胺T溶解10mL蒸餾水，依次加入10mL正丙醇和80mLpH6緩沖液。顯色劑(此溶液現(xiàn)用現(xiàn)配)：稱取10.09對二氨基苯甲醛，35mL高氯酸溶解，混勻后緩慢加人65mL異丙醇。

配制L-HYP標準貯備液(500μg/mL)：準確稱取L-HYP標準品0.2500g，加入1滴1mol/L鹽酸溶解，蒸餾水定容至500mL，4℃冰箱保存。標準曲線工作母液配制(現(xiàn)用現(xiàn)配)：分別吸取500μg/mL?L-HYP標準貯備液0、0.5、1、2、4、6、8mL至100mL容量瓶，定容至100mL，得到濃度分別為0、2.5、5、10、20、30、40μg/mL的L-HYP標準曲線工作母液。以蒸餾水為空白，吸取L-HYP標準工作母液1mL，加入氯胺T2mL溶液，充分混勻后室溫條件下反應20min后，加入顯色劑2mL，于60℃水浴恒溫反應20min，迅速冷卻至室溫后定容至25ml，558nm測定吸光度。以L-HYP濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，求出回歸方程和相關系數(shù)。

準確稱取20g奶粉(精確至0.0001g)于250mL容量瓶中，邊轉動容量瓶邊加入亞鐵氰化鉀溶液20ml，搖勻后，再加入醋酸鋅溶液20ml，以沉淀蛋白質。然后，加水至刻度，混勻，放置半小時后，棄去上層脂肪，清液用濾紙或脫脂棉過濾，棄去初濾液5～10ml，濾液備用。從制備好的待測液中吸取2mL于25mL具塞試管。吸取待測液1mL，加入氯胺T2mL溶液，充分混勻后室溫條件下反應20min后，加入顯色劑2mL，于60℃水浴恒溫反應20min，迅速冷卻至室溫后定容至25ml，以蒸餾水為空白，558nm測定吸光度。每個樣品做3次重復。將吸光度代人回歸方程求出羥脯氨酸含量。