[發明專利]一種測定血清中藥物活性成分的方法

有效

• 申請號: 200910049665.0
• 申請日: 2009-04-20
• 公開（公告）號: CN102486472A
• 公開（公告）日: 2012-06-06
• 發明（設計）人: 張衛東;丁建彌;柳潤輝;陳忠樑;姜鵬;徐瑞林;張正光;孫志男;潘芳芳
• 申請（專利權）人: 上海和黃藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/72
• 分類號: G01N30/72;G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬藥物分析領域，涉及一種測定血清中藥物活性成分的方法，尤其涉及測定血清中復方中藥的活性成分的方法。?

背景技術

復方中藥以其獨特的療效和較小的副作用，在臨床上應用已經有數千年的歷史。但是由于其中存在著眾多的化學成分，使得對復方中藥的作用物質基礎以及復方中藥的作用機制的研究相當困難。血清藥物化學研究顯示，中藥中雖含有諸多成分，但只有被吸收入血的成分才能產生作用，被認為藥物活性成分。傳統中藥多為口服給藥，口服給藥后藥物成分或經過消化道直接吸收入血，或經肝微粒體酶代謝后入血，其活性成分以血液為介質輸送到靶點，從而產生作用。血清中含有的成分被認為是中藥在體內直接起作用的物質。自1992年Homma首次提出血清藥物化學的概念以來(Homma?M等Analytical?Biochemistry?1992；202：179-187.)，血清藥物化學已經已經在國際上獲得廣泛認可。?

麝香保心丸(國藥準字Z31020068)主要含麝香、人參提取物、人工牛黃、肉桂、蘇合香、蟾酥、冰片。麝香保心丸是芳香溫通類治療胸痹(冠心病、心絞痛)的代表復方中藥藥物，因其療效確切、安全方便、價格經濟，而成為治療冠心病、心絞痛的常用藥物之一。據統計，麝香保心丸在芳香溫通類治療胸痹的中藥中穩居第一，是唯一在全國擁有較高知名度的獨家傳統中藥大品種。所述復方中藥的藥物活性成分測定已受到本領域研究者的關注。?

發明內容

本發明的目的是提供一種測定血清中藥物活性成分的方法，具體涉及一種測定血清中治療心血管疾病的復方中藥的活性成分的方法。?

本發明所涉及的治療心血管疾病的復方中藥是麝香保心丸(國藥準字Z31020068)主要含下述原料藥組分：麝香、人參提取物、人工牛黃、肉桂、蘇合香、蟾酥、冰片，目前該藥物的作用物質基礎仍然不明確。?

由于中藥成分復雜，導致藥物作用物質基礎不明確。現有對中藥的藥效成分研究多偏重于單個成分的藥理藥效評價，脫離了中醫整體協同作用的理論。本發明將復方中藥作為一個整體進行研究，本發明采用高效液相色譜-質譜聯用的方法，分析給藥后大鼠血清、空白大鼠血清以及藥物的提取液，測定該藥物中能進入血液發揮藥效的活性成分即藥物的作用物質基礎，并在此基礎上確定這些作用物質基礎在藥物中的含量。?

本發明方法包括如下步驟：?

1.配制藥物提取液?

取500mg藥物粉末，用6.5ml混合溶劑超聲提取后12000r/min離心，上清液過0.45μm濾膜過濾，得到配制的藥物提取液；?

本發明在制備藥物提取液中，采用的混合溶劑及其比例為甲醇∶二氯甲烷∶水＝4∶2∶0.5(V/V)，超聲時間為20min。?

2.制備空白血清樣品?

羧甲基纖維素鈉用純水制成0.5％的混懸液，用于SD大鼠灌胃給藥(1ml/kg大鼠體重)，灌胃0.5-3小時后，腹腔注射1％的戊巴比妥鈉溶液(0.15ml/kg大鼠體重)麻醉大鼠，靜脈取血，置于涂肝素鈉的EP管中，在4℃條件下，3000r/min離心10min；取上清液400μl，加入到5ml?EP管中；沉淀蛋白后，渦旋1min，12000r/min離心10分鐘，上清液真空旋轉蒸干，殘渣加入200μl甲醇復溶，離心；上清液即為空白血清樣品；?

3.制備給藥后血清樣品?

所述復方中藥藥物粉碎成細粉后，用0.5％的羧甲基纖維素鈉制成混懸液，藥物的濃度為0.34g/ml；SD大鼠給予藥物混懸液灌服(3.4g/kg大鼠體重)。服藥0.5-3小時后，大鼠腹腔注射1％的戊巴比妥鈉溶液(0.15ml/kg大鼠體重)麻醉，靜脈取血，置涂肝素鈉的EP管中，4℃條件下，3000r/min離心10min，取上清液400μl，加入5ml?EP管中，沉淀蛋白后，渦旋1min，12000r/min離心10分鐘，上清液真空旋轉蒸干，殘渣加入200μl甲醇復溶，離心；上清液即為給藥后血清樣品；?

本發明在制備空白或給藥血清樣品中，采用灌胃后2小時從肝門靜脈取血，每400μl血清用甲醇3ml沉淀蛋白；流動相為乙腈∶0.5％甲酸水溶液。?

4.高效液相色譜-質譜聯用分析?