[發(fā)明專利]一種分離提純草胡椒素B的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910049488.6
• 申請日: 2009-04-17
• 公開（公告）號: CN101863882A
• 公開（公告）日: 2010-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊國紅;王奇巍;林夢感;朱文君
• 申請（專利權(quán)）人: 上海醫(yī)藥工業(yè)研究院
• 主分類號: C07D407/06
• 分類號: C07D407/06;A61P35/00
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 薛琦;朱水平

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種分離提純草胡椒素B的方法。

背景技術(shù)

草胡椒屬(Peperomia?Ruiz?et?Pavon)植物系胡椒科(Piperaceae)，具有清熱解毒、化瘀散結(jié)、利水消腫的功效，中醫(yī)上常用于風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、癰腫瘡毒等。草胡椒素B(Peperomin?B，式1)具有較好的抑制腫瘤的活性，可從草胡椒屬多種植物如石蟬草中分離得到。

式1

提取草胡椒素B的工藝中，現(xiàn)有文獻(xiàn)《Bioactive?Secolignans?from?Peperomia?dindygulensis》(Jian-lin?Wu，ect.，J.Nat.Prod.2006，69：790-794)報(bào)道，可從1.75公斤石蟬草中分離得到草胡椒素B79.7mg。其方法為，將藥材粉碎，用甲醇提取3次，之后再用乙酸乙酯萃取，再將乙酸乙酯的部分通過正相硅膠柱被分為12個(gè)部位，第7個(gè)部位的3.25g通過正相制備液相色譜分離，得到草胡椒素B79.7mg，其收率為2.45％(79.7mg/3.25g×100％)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服了現(xiàn)有的提純草胡椒素B方法的制得量小，收率低等缺陷，提供了一種分離提純草胡椒素B的方法。該方法制備草胡椒素B，分離速度快，收率高，制備量大，產(chǎn)品純度高，生產(chǎn)成本低，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明提供了一種分離提純草胡椒素B(Peperomin?B，式1)的方法，其步驟包括：將草胡椒素B粗品干法上樣至正相硅膠柱，以二氯甲烷和丙酮的混合液為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，洗脫梯度為從含體積百分比1％-30％丙酮的二氯甲烷溶液，逐漸增大丙酮的含量，洗脫至含體積百分比10％-60％丙酮的二氯甲烷溶液，收集草胡椒素B部分的洗脫液，即可。

其中，所述的草胡椒素B粗品為從含有草胡椒素B的植物原料中提取所得，較佳的為從石蟬草中提取所得。較佳的，所述的草胡椒素B粗品由下述方法制得：將含有草胡椒素B的植物原料用甲醇、乙醇、或體積百分比50％以上的甲醇和/或乙醇的水溶液提取，得提取物，再用氯仿萃取，之后，將氯仿萃取物用硅膠柱分離一次，即可。其中，所述的用硅膠柱分離，較佳的按下述操作：收集以體積比為3∶1的正己烷和乙酸乙酯的混合溶劑為展開劑，硅膠薄層層析板上Rf值為0.2-0.3的洗脫部分，即得草胡椒素B粗品。所述的用硅膠柱分離較佳的用石油醚和乙酸乙酯混合物，按照二者體積比為100∶0至5∶1梯度洗脫。所述的草胡椒素B粗品的純度一般為30％左右。

其中，所述的干法上樣，較佳的按下述操作：將草胡椒素B粗品溶于常規(guī)可溶解草胡椒素B的溶劑中，硅膠拌樣，上樣，即可。

其中，所述的可溶解草胡椒素B的溶劑較佳的選自二氯甲烷、三氯甲烷和丙酮。所述的干法上樣，上樣量為草胡椒素B粗品與硅膠柱中硅膠的質(zhì)量比較佳的為1∶80～1∶120，更佳的為1∶100。較佳的在上樣時(shí)，將樣品填裝于相應(yīng)的上樣筒中上樣。

其中，所述的正相硅膠柱為本領(lǐng)域常規(guī)使用的正相硅膠柱，所選擇的柱較佳的為預(yù)裝柱，其規(guī)格為本領(lǐng)域常規(guī)使用的規(guī)格，通常為市售統(tǒng)一規(guī)格。所述的正相硅膠柱的徑長比較佳的為1∶5～1∶7，更佳的為1∶6。

其中，所述的梯度洗脫的洗脫梯度較佳的為線性洗脫梯度，可采用機(jī)器設(shè)備達(dá)到線性梯度洗脫。其中，所述的梯度洗脫中，洗脫時(shí)間較佳的為從1-45min，洗脫速度較佳的為25-70mL/min，更佳的為40-60mL/min，最佳的為50mL/min；檢測波長較佳的為254nm，此波長為固定單波長檢測。

其中，所述的收集的草胡椒素B部分的洗脫液還可以按照本領(lǐng)域常規(guī)方法，將其濃縮并干燥，制得所述的草胡椒素B純品。

本發(fā)明中，上述的各技術(shù)特征的優(yōu)選條件可以任意組合，得到較佳的技術(shù)方案用于制備草胡椒素B。

本發(fā)明一較佳實(shí)例為：將草胡椒素B粗品溶于二氯甲烷中，硅膠拌樣，上樣至正相硅膠柱上，洗脫劑為二氯甲烷和丙酮的混合液，設(shè)定從1％丙酮的二氯甲烷溶液到10％丙酮的二氯甲烷溶液的梯度洗脫，或從10％丙酮的二氯甲烷溶液到20％丙酮的二氯甲烷溶液的梯度洗脫，或從20％丙酮的二氯甲烷溶液到30％丙酮的二氯甲烷溶液的梯度洗脫，時(shí)間為30-40分鐘，流速為25-50ml/min，收集草胡椒素B部分的洗脫液，即可。

其中，較佳的，將收集的草胡椒素B部分的洗脫液濃縮，得到草胡椒素B純品。

本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。