[發(fā)明專利]一種利用高通量測(cè)序單通道復(fù)用技術(shù)進(jìn)行microRNA表達(dá)譜測(cè)定的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910049381.1
• 申請(qǐng)日: 2009-04-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101864477A
• 公開(kāi)（公告）日: 2010-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉極龍;曾華宗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海聚類生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種在超高通量新一代測(cè)序方法中利用單個(gè)通道同時(shí)檢測(cè)多個(gè)生物樣品的microRNA表達(dá)量的技術(shù)，其特征在于：

步驟1：收集多個(gè)不同的生物樣本(2～20例均可)。

步驟2：通過(guò)Trizol法提取總RNA。

步驟3：進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳回收17～27nt?RNA分子。

步驟4：在加入接頭的時(shí)候引入條碼序列標(biāo)記

步驟5：將標(biāo)記后的樣本等量混合

步驟6：利用RT引物，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

步驟7：進(jìn)行高通量并行測(cè)序。

步驟8：數(shù)據(jù)解碼與分析，計(jì)算microRNA的表達(dá)譜數(shù)據(jù)。

2.一種能自動(dòng)糾錯(cuò)的核酸條碼設(shè)計(jì)方案，其特征在于：

利用計(jì)算機(jī)程序隨機(jī)產(chǎn)生條碼序列，然后利用算法進(jìn)行優(yōu)化，使得相同位置的堿基重復(fù)最少。保證在單個(gè)堿基測(cè)序錯(cuò)誤的情況下，條碼依然可以正確區(qū)分序列的樣本來(lái)源。使得測(cè)序結(jié)果更為可靠。

3.臨近條碼區(qū)域分割堿基的設(shè)計(jì)方法，其特征在于：

在條碼標(biāo)記的5’端或3’端引入分割堿基，一般一個(gè)或數(shù)個(gè)堿基即可。分割堿基的意義在于保證不同樣本在接頭連接時(shí)接觸到是相同的堿基，以保證連接效率一致。使樣本間具有更好的平行性。

4.在高通量測(cè)序儀器Solexa，454(GS-FLX)，SOLiD和Polonator的單個(gè)測(cè)序通道中同時(shí)測(cè)定2到20個(gè)生物樣品的microRNA表達(dá)量。