[發明專利]一種利用高通量測序單通道復用技術進行microRNA表達譜測定的方法無效
| 申請號： | 200910049381.1 | 申請日： | 2009-04-15 |
| 公開（公告）號： | CN101864477A | 公開（公告）日： | 2010-10-20 |
| 發明（設計）人： | 劉極龍;曾華宗 | 申請（專利權）人： | 上海聚類生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 200333 上海市*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 通量 測序單 通道 技術 進行 microrna 表達 測定 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種在超高通量新一代測序方法中利用單個通道同時檢測多個生物樣品的microRNA表達量的技術，其特征在于：
步驟1：收集多個不同的生物樣本(2～20例均可)。
步驟2：通過Trizol法提取總RNA。
步驟3：進行聚丙烯酰胺凝膠電泳回收17～27nt?RNA分子。
步驟4：在加入接頭的時候引入條碼序列標記
步驟5：將標記后的樣本等量混合
步驟6：利用RT引物，進行反轉錄。然后進行PCR擴增。
步驟7：進行高通量并行測序。
步驟8：數據解碼與分析，計算microRNA的表達譜數據。
2.一種能自動糾錯的核酸條碼設計方案，其特征在于：
利用計算機程序隨機產生條碼序列，然后利用算法進行優化，使得相同位置的堿基重復最少。保證在單個堿基測序錯誤的情況下，條碼依然可以正確區分序列的樣本來源。使得測序結果更為可靠。
3.臨近條碼區域分割堿基的設計方法，其特征在于：
在條碼標記的5’端或3’端引入分割堿基，一般一個或數個堿基即可。分割堿基的意義在于保證不同樣本在接頭連接時接觸到是相同的堿基，以保證連接效率一致。使樣本間具有更好的平行性。
4.在高通量測序儀器Solexa，454(GS-FLX)，SOLiD和Polonator的單個測序通道中同時測定2到20個生物樣品的microRNA表達量。
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