[發明專利]中藥唐草片的質量標準及檢測方法

有效

• 申請號: 200910048798.6
• 申請日: 2009-04-03
• 公開（公告）號: CN101850070A
• 公開（公告）日: 2010-10-06
• 發明（設計）人: 楊莉婭;朱園英;黃艷春;邵寶平
• 申請（專利權）人: 上海百歲行藥業有限公司
• 主分類號: A61K36/899
• 分類號: A61K36/899;A61K9/20;A61P31/18;G01N30/36;G01N30/90;A61K35/64
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 王巍

1.一種治療艾滋病中藥唐草片的質量標準：其特征在于所述質量標準如下：

(1)唐草片樣品中的全蝎顯微鑒別，呈顯微特征圖；

(2)唐草片樣品中甘草的薄層鑒別，呈特征色譜圖；

(3)唐草片樣品中糯稻根的薄層鑒別，呈特征色譜圖；

(4)唐草片樣品中胡黃連的薄層鑒別，呈特征色譜圖；

(5)唐草片樣品中老鸛草、石榴皮的薄層鑒別，呈特征色譜圖；

(6)唐草片樣品中柴胡的薄層鑒別，呈特征色譜圖；

(7)唐草片樣品中銀杏葉的薄層鑒別，呈特征色譜圖；

(8)唐草片樣品中黃芪的薄層鑒別，呈特征色譜圖；

(9)唐草片樣品中金銀花-綠原酸的高效液相色譜測定，含量以綠原酸(C₁₆H₁₈O₉)計，不得少于0.13％；

(10)唐草片樣品中金銀花-木犀草苷的高效液相色譜測定，含量以木犀草苷(C₂₁H₂₀O₁₁)計，不得少于0.05％；

(11)唐草片樣品中黃芪-黃芪甲苷的高效液相色譜測定，含量以黃芪甲苷(C₄₁H₆₈O₁₄)計，不得少于0.02％；

(12)唐草片樣品中紅花-紅花黃色素A的高效液相色譜測定，含量以羥基紅花黃色素A(C₂₇H₃₀O₁₅)計，不得少于0.5％。

2.一種如權利要求1所述的中藥唐草片的檢測方法，其特征在于該方法包括下列步驟：

(1)顯微法鑒別：

全蝎顯微鑒別特征：取唐草片樣品適量，置顯微鏡下觀察，體壁碎片淡黃色至黃色，有網狀紋理及圓形毛窩；有時可見棕褐色剛毛；

(2)薄層層析色譜法：

A、甘草鑒別：取唐草片樣品適量，研細，加水或乙醇等溶媒溶解，置水浴上加熱回流或超聲提取，放冷，離心，取上清液，用乙醚振搖提取1-3次，每次適量，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇提取1-3次，每次適量，合并正丁醇提取液，用等量的正丁醇飽和的水洗滌1-3次，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，離心，取上清液作為供試品溶液；另取甘草對照藥材，同法制成對照藥材溶液，再取甘草苷對照品，加甲醇制成對照品溶液，照薄層色譜法中國藥典2005年版一部附錄VI?B試驗，吸取上述三種溶液各適量，分別點于同一硅膠薄層板上，用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10，10℃以下放置的下層溶液或以適合的展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液或以2％對二甲氨基苯甲醛40％硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點；

B、糯稻根鑒別：取唐草片樣品適量，研細，加乙酸乙酯或甲醇等溶媒適量，回流或超聲處理提取，離心，取上清液蒸干，殘渣加無水乙醇或甲醇適量使溶解，作為供試品溶液。另取糯稻根對照藥材，同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法中國藥典2005年版一部附錄VI?B試驗，吸取上述兩種溶液各適量，分別點于同一硅膠G薄層板上，用甲苯-乙酸乙酯4∶1或苯-氯仿-甲醇5∶5∶1展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％對二甲氨基苯甲醛40％硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點及熒光斑點；

C、胡黃連鑒別：取唐草片樣品適量，研細，加水或乙醇或甲醇等溶媒，使濕潤，加甲醇或乙醇適量，加熱回流或超聲提取，離心，取上清液蒸干，殘渣加水飽和的正丁醇適量使溶解，用等量的正丁醇飽和的水洗滌1-3次，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，離心，取上清液作為供試品溶液；另取胡黃連苷-II對照品，加甲醇制成對照品溶液，照薄層色譜法中國藥典2005年版一部附錄VI?B試驗，吸取上述兩種溶液各適量，分別點于同一硅膠薄層板上，用乙酸乙酯-乙醇-水8∶2∶1或甲苯-氯仿-甲醇5∶5∶1或氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10，10℃以下放置后的下層溶液或以適合的展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％對二甲氨基苯甲醛40％硫酸溶液或10％硫酸溶液等顯色劑，顯色，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

D、老鸛草、石榴皮鑒別：取唐草片適量，研細，加溶媒50-100ml，置沸水浴加熱或超聲提取，放冷，離心，取上清液，加乙酸乙酯振搖提取兩次，每次20-40ml，合并乙酸乙酯層，蒸干，殘渣加乙酸乙酯適量使溶解，作為供試品溶液；另取老鸛草對照藥材、石榴皮對照藥材各適量，分別同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法中國藥典2005年版一部附錄VI?B試驗，吸取上述三種溶液各適量，分別點于同一硅膠薄層板上，用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸4∶5∶1或以苯-氯仿-甲醇-冰乙酸5∶5∶2∶0.5或以氯仿-乙酸乙酯4∶5為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；或加熱，置碘蒸氣中熏至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

E、柴胡鑒別：取唐草片樣品適量，研細，加水或乙醇或甲醇等溶媒，置水浴上加熱回流或超聲提取，放冷，離心，取上清液，用乙醚振搖提取1-3次，每次適量，棄去乙醚液，再用水飽和的正丁醇振搖提取1-3次，每次適量，合并正丁醇提取液，用等量的氨試液洗滌，再用等量的正丁醇飽和的水洗滌1-3次，正丁醇液蒸干，殘渣加溶劑使溶解，離心，取上清液作為供試品溶液；另取柴胡對照藥材同法制成對照藥材溶液，照薄層色譜法中國藥典2005年版一部附錄VI?B試驗，吸取上述兩種溶液各適量，分別點于同一硅膠薄層板上，用甲苯-氯仿-甲醇5∶5∶1或乙酸乙酯-乙醇-水8∶2∶1或氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10，10℃以下放置后的下層溶液；或氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10，10℃以下放置后的下層溶液+5滴甲醇或以合適的展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％對二甲氨基苯甲醛40％硫酸溶液或者10％硫酸溶液等顯色劑，顯色，加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的主斑點及熒光主斑點；

F、銀杏葉鑒別：取唐草片制劑樣品適量，研細，加50％丙酮100ml，加熱回流，放冷，濾過，濾液蒸去丙酮，水液用乙酸乙酯適量振搖提取，乙酸乙酯液蒸干，殘渣用5-25％乙醇使溶解，通過聚酰胺柱60-90H，內徑1.5cm，長10cm，用5-10％乙醇洗脫，洗脫液濃縮至，放冷，用乙酸乙酯振搖提取1-3次，蒸干，殘渣用丙酮使溶解，作為供試品溶液。另取銀杏葉對照提取物，加丙酮適量制成對照品溶液，照薄層色譜法中國藥典2000年版一部附錄VI?B試驗，吸取上述兩種溶液各適量，分別點于同一硅膠薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇10∶5∶5∶0.6或以乙酸乙酯-丁酮-甲醇-水5∶3∶1∶1為展開劑，展開，取出，晾干，加熱30分鐘，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；

G、黃芪鑒別：取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成對照品溶液，照薄層色譜法中國藥典2005年版一部附錄VI?B試驗，吸取對照品溶液和鑒別E項下的供試品溶液各適量，分別點于同一硅膠薄層板上，用乙酸乙酯-乙醇-水8∶2∶1展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％對二甲氨基苯甲醛40％硫酸溶液或者10％硫酸溶液顯色劑，在加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；

(3)高效液相色譜法定量測定唐草片中樣品金銀花的綠原酸、木樨草苷成分，黃芪的黃芪甲苷成分；紅花的羥基紅花黃色素A成分，照高效液相色譜法中國藥典2000年版一部附錄VI?D測定，具體步驟包括：

A、金銀花中綠原酸、木樨草苷的含量測定方法：

綠原酸：取唐草片樣品適量，研細，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加50％以上甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，取出，放至室溫，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，為供試品溶液，以綠原酸對照品，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為乙腈-水-磷酸10∶89.1∶0.9，檢測波長為327nm，精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定；

木樨草苷：取唐草片樣品適量，研細，取約3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70％乙醇50ml，稱定重量，超聲處理約1小時，放冷，再稱定重量，用70％乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，為供試品溶液。以木犀草苷對照品，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為乙腈流動相A，以0.5％冰乙酸溶液流動相B，按0～30分鐘，A∶B→10∶90，30～55分鐘，A∶B→30∶70，進行梯度洗脫；檢測波長為350nm。精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定；

B、黃芪中黃芪甲苷含量：取唐草片樣品適量，研細，取約3g，精密加入50％以上甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘，放冷，再次稱定重量，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液40ml，水浴蒸干，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱內徑1.5cm，長12cm，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，為供試品溶液，以黃芪甲苷對照品，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為乙腈-水32∶68；檢測器為蒸發光散射，精密吸取對照品溶液10μl、20μl，供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點法對數方程計算；

C、紅花中羥基紅花黃色素A含量：取唐草片樣品適量，研細，取約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入25％甲醇50ml，稱定重量，超聲處理40分鐘，放冷，再稱定重量，用25％甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，為供試品溶液，以羥基紅花黃色素A對照品，色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液26∶2∶72，檢測波長為403nm，精密吸取溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定。