[發明專利]一種聯合快速檢測流行性乙型腦炎病毒、登革病毒和西尼羅病毒試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 200910047186.5
• 申請日: 2009-03-06
• 公開（公告）號: CN101629215A
• 公開（公告）日: 2010-01-20
• 發明（設計）人: 曹廣文;李淑華;劉世建;常文軍;張宏偉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 王 巍

技術領域

本發明涉及生物試劑，具體涉及檢測臨床樣品中乙型腦炎的病毒(JEV)，登革病毒(DEV)及西尼羅病毒(WNV)存在的方法及試劑盒。特別涉及一種聯合快速檢測流行性乙型腦炎病毒、登革病毒和西尼羅病毒試劑盒及其檢測方法。

背景技術

黃病毒科中多種病毒能引起人類和動物的嚴重疾病，特別是腦炎和出血熱，有較高的死亡率。該類病毒感染的臨床表現比較復雜，常常被誤診或冠以“無名熱”。目前常見的黃病毒感染為登革熱和乙型腦炎，可能還會有新的黃病毒出現，如西尼羅病毒目前在全球范圍內仍呈現繼續擴散的趨勢，帶來突發傳染病的嚴重威脅，可預見的后果非常嚴重。因此有必要進行完善的技術儲備，加強突發傳染病病原體來源追蹤和早期快速偵檢研究對及時控制急性傳染病疫情和生物災難意義重大，但目前對于這些疾病的早期快速診斷尚無完善的方法。

1.流行性乙型腦炎(乙腦)病毒又稱日本腦炎病毒(Japanese?encephalitisvirus，JEV)屬于黃病毒科(Flaviviridae)、黃病毒屬(Flavivirus)，有包膜的單正鏈RNA病毒，三帶喙庫蚊為主要傳播媒介，主要在亞洲流行，可引起嚴重的神經系統傳染病，致死率高達30％左右；另有50％的患者會留下永久性的神經系統后遺癥。據統計，亞洲每年乙腦發病人數達16?000例左右，死亡5?000例左右，中國除新疆、西藏、青海外，其它各省均有發病與流行，腦炎發病數占世界總發病數的80％以上，是危害人民生命及畜牧業的最重要的蟲媒病毒之一，近年澳大利亞本土和美國的關島地區也出現乙腦病例，說明該病的流行區域在不斷擴大，成為嚴重的公共衛生問題。加強監測和診斷是十分重要的。

乙型腦炎病例的診斷主要依靠流行病學、臨床特征和實驗室檢查三方面證據。實驗室檢查主要有血清學診斷、分離培養和分子生物學方法，然而，主要針對抗體的血清學診斷方法不能在疾病早期提供有力的診斷證據。不利于病人的早期診斷和治療。病毒分離培養方法耗時、費力，檢出率低。RT-PCR方法雖然靈敏并能在早期對病毒進行檢測，但是因其步驟繁瑣且容易造成污染，從而使用受到限制。實時熒光定量PCR技術雖然具有特異性和精確度更強、自動化程度更高以及污染的可能性更小等優點。但由于實驗成本高，使用儀器精良而不宜在基層和現場使用。

2.登革病毒(dengue?virus，DV)屬黃病毒科(Flaviviridae)、黃病毒屬(Flavivirus)，根據抗原性不同，可將登革病毒分為1、2、3、4四個血清型。登革病毒感染(dengue?virus?infect，DVI)可引起登革熱(dengue?fever，DF)和登革出血熱(dengue?hemorrhage?fever，DHF)，后者死亡率較高。登革熱是一種熱帶傳染病，主要由埃及伊蚊和白紋伊蚊為傳播媒介，其傳染性僅次于艾滋病和非典。近年來，登革熱廣泛流行于100多個國家和地區，特別是東南亞一帶的流行甚為嚴重。據世界衛生組織報道，每年約有0.8～1億例DVI，50萬例DHF，2.5萬人死亡，15億人受到威脅。由于登革熱臨床表現復雜多樣、傳播迅速、發病率高、人群易感染，嚴重影響了人們的生活質量和身體健康。由于登革熱沒有特異性的治療方法，也沒有有效的疫苗進行預防，因此及時發現登革熱疫情、阻止或減少本地登革熱疫情傳播就變得尤為重要。研究快速檢測方法在登革熱的預防和控制中具有重要意義。

目前，登革病毒感染的診斷，主要依靠病毒分離和血清學檢測。但病毒分離法費時繁瑣、至少需1周時間才能出結果，達不到早期快速診斷的目的。血清學診斷因與其他黃病毒存在廣泛的交叉反應而受到干擾。近年來，隨著分子生物學技術的不斷發展與完善，以及技術服務市場化，對登革病毒感染的診斷，已經從傳統的病毒分離、血清學檢查，進入到對病毒RNA進行分子檢測的新階段，為登革熱早期診斷和流行監測提供了有效手段，如RT-PCR，nested-PCR，Real-time?PCR，TaqMan探針，基因芯片等，但這些技術方法可能出現假陽性，并由于檢測煩瑣，成本高，實驗室及儀器設備要求精良等，不適宜在基層和現場使用。