[發明專利]一種針對PKCγ基因RNA干擾的重組慢病毒載體的構建及其應用

無效

• 申請號: 200910043271.4
• 申請日: 2009-04-30
• 公開（公告）號: CN101575615A
• 公開（公告）日: 2009-11-11
• 發明（設計）人: 鄒望遠;郭曲練;宋宗斌;張重;劉暢;趙媛
• 申請（專利權）人: 中南大學
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;A61K48/00;A61P29/00
• 代理公司: 長沙市融智專利事務所
• 代理人: 顏 勇

技術領域

本發明屬于分子生物學與生物醫藥技術領域。具體涉及一種針對PKCγ基因RNA干擾的重組慢病毒載體及其構建方法，并將這種病毒載體用于制備治療慢性神經病理性疼痛的藥物。

背景技術

(1)PKCγ基因是慢性神經病理性疼痛治療重要的分子靶。

慢性疼痛不僅是醫學界的一個難題，而且已成為社會經濟的一大負擔，據統計，全世界有三億二千多萬人受到慢性疼痛的困擾。神經病理性疼痛(Neuropathic?Pain)是與多種周圍神經障礙相關聯的一組共同表現的癥狀，包括與糖尿病、甲狀腺功能低下、尿毒癥、營養缺乏和化療藥物(長春新堿、順鉑等)相關的神經障礙；也包括：格-巴二氏綜合征、帶狀皰疹后神經痛、進行性神經病性肌萎縮病、復合性局部疼痛綜合征I型和缺血性神經病變等(Gregory?T，2001)。國際疼痛研究會(IASP，1994)將這種由于外周或中樞神經系統的直接損傷功能紊亂引起的疼痛稱為神經病理性疼痛。神經病理性疼痛是醫學領域的挑戰性研究課題，目前發病機制不清，尚缺乏有效的治療措施。近年來，對外周神經損傷所致的神經病理性疼痛的分子、細胞機制，特別是在初級感覺神經原和脊髓水平的研究積累了比較豐富的資料，為進一步研究提供了基礎。

在外周神經受損引起的慢性神經病理性疼痛，常表現痛覺過敏、自發性疼痛、痛感覺異常等。眾多研究表明：痛覺過敏等反應性增強過程可能與中樞敏感化有關，眾多致痛性物質、神經遞質以及其所引起的細胞內第二信使的變化在中樞敏感化的形成過程中可能發揮重要作用，尤其是蛋白激酶C(protein?kinase?C，PKC)在其中起著關鍵性的作用。PKC是重要的細胞內信號轉導分子，是磷酸脂依賴的絲氨酸和蘇氨酸激酶異構酶，在細胞內信號轉導起重要作用。PKC?cDNA克隆的研究表明PKC包含一個超家族。其中PKCγ主要存在于大腦和脊髓中，研究表明PKCγ陽性神經元主要位于脊髓背角的II層內側部及II、III層的交界處，而脊髓背角淺層(I、II層)是外周傷害性信息傳遞和調控的初級中樞，傳遞傷害性信息的Aδ纖維和C纖維多終止于I、II層，尤其是II層，它們在傷害性信息傳遞、整合過程中發揮重要作用。Hua等在結扎一側坐骨神經的大鼠鞘內注射PKC抑制劑GF109203X，發現其具有明顯的抗痛覺過敏效應，由此推斷PKC在神經損傷誘發的痛覺過敏中發揮重要作用。Martin等在大鼠完全氟氏佐劑致痛模型中發現，在致痛側L₄～L₅背角淺層各時間點PKCγ免疫性反應增加70～100倍，行為學表現為機械性痛覺過敏，上述結果提示：PKCγ免疫反應的持續性改變與機械性痛覺過敏相一致，痛覺過敏的維持依賴于PKCγ調節興奮性中間神經元所致。Malmberg等發現.PKCγ基因敲除的小鼠發育正常，在坐骨神經結扎疼痛模型上，幾乎不能形成神經痛但其急性痛行為正常，說明PKCγ在痛覺過敏中起關鍵性作用。國內萬麗等報道對大鼠鞘內注射反義PKCγ寡核甘酸對慢性神經痛有明顯鎮痛效應，但是具體機制尚不清楚。因此PKCγ基因是慢性神經病理性疼痛治療重要的分子靶。

(2)鞘內注射高轉染效率的編碼PKCγ基因shRNA重組慢病毒載體對NP大鼠的鎮痛效應。