[發(fā)明專利]一種長春堿類生物堿的分離純化方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910042236.0
• 申請日: 2009-08-28
• 公開（公告）號: CN101638413A
• 公開（公告）日: 2010-02-03
• 發(fā)明（設計）人: 黃翔;馮錦玲;陳日星;張燕娜;羅展良;梁麗思
• 申請（專利權）人: 廣州漢方現代中藥研究開發(fā)有限公司
• 主分類號: C07D519/04
• 分類號: C07D519/04
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司
• 代理人: 陳 衛(wèi)

技術領域

本發(fā)明涉及長春堿類生物堿，具體地說，涉及長春堿類生物堿的 分離純化方法。

背景技術

長春堿是夾竹桃科植物(Catharanthus?roseus)中所含生物堿的一 種，作為一種抗有絲分裂藥物，能夠抑制微管聚合并誘導自締合的微 管蛋白形成盤繞的螺旋形合體。長春堿自1958年被分離到現在的50 年間，人們已通過化學方法合成了包括長春堿在內的一系列長春堿類 衍生物，其中長春堿、長春新堿、長春地辛、長春瑞濱等長春堿類生 物堿已作為當今一大類重要的抗腫瘤藥物。

從植物提取分離的長春堿或通過化學半合成方法得到的長春堿 類生物堿，一般都含有較多雜質。另外由于長春堿類生物堿結構復雜， 性質不太穩(wěn)定，受熱、光照或長時間暴露在空氣中都容易變質。故一 般的柱層析分離或單靠重結晶辦法難以得到較高純度的長春堿類生 物堿。為此，人們在長期的生產和科學實驗中，摸索出多種有效分離 純化方法，其中以常規(guī)柱層析分離結合重結晶技術較為普遍，也有通 過C18反相柱層析分離結合重結晶技術制得符合藥典質量標準的產 品的方法，然而這種分離純化技術目前主要應用在長春瑞濱的生產 上。

上述方法中，不僅技術專屬性強，而且一般需要反復過柱、多次 重結晶，操作繁瑣、溶劑耗用量大，并由此帶來了環(huán)境污染問題比較 嚴重。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服現有技術存在的不足，提供一種純度高、 無須使用特殊填料、也不需要使用高毒性溶劑、操作簡單的長春堿類 生物堿的分離純化方法。

一種長春堿類生物堿的分離純化方法，包括如下步驟：

(1)粗品的預處理：將長春堿類生物堿粗品濕法上于氧化鋁柱上，用 二氯甲烷-乙醇或三氯甲烷-甲醇洗脫，薄層層析跟蹤柱層析分離情況， 收集生物堿流份，合并后減壓濃縮至干，得預處理制品；

由于無論是從植物提取物或是半合成得到的長春堿類生物堿粗 品一般均含有較多的雜質，不經預處理步驟步驟直接上樣進行制備色 譜分離純化，往往會導致固定相填料污染，影響制備柱的柱效及使用 次數。因此，在生物堿粗品進入制備色譜分離純化時，最好先將樣品 進行預處理，使粗品得到初步分離。個別情況也有例外，如長春地辛 粗品可以直接用制備色譜進行分離，效果很好。

(2)高效液相色譜分離：先制備色譜柱固定相，填料為硅膠，預處理 制品進樣后，用三氯甲烷-甲醇或二氯甲烷-乙醇作為流動相進行梯度 洗脫，檢測器跟蹤制備色譜分離情況，薄層層析或高效液相檢測，合 并富含長春堿流份；

(3)重結晶：將生物堿流份于30～50℃減壓濃縮至干，用1～5倍體 積低級脂肪醇溶解，然后于-20～-10℃放置結晶，過濾，干燥后得 到高純度的長春堿類生物堿。

在上述長春堿類生物堿的分離純化方法中，步驟(1)所述長春 堿類生物堿包括長春堿、長春新堿、長春地辛或長春瑞濱等等。

在上述長春堿類生物堿的分離純化方法中，步驟(1)所述氧化 鋁柱的固定相所用的填料優(yōu)選為中性氧化鋁，粒度為100～200目， 生物堿粗品與氧化鋁的配比為質量比1∶10～1∶40，其流動相所用 溶劑為二氯甲烷或三氯甲烷。

在上述長春堿類生物堿的分離純化方法中，步驟(2)所述分離 生物堿與硅膠的質量比為1∶20～1∶60，流動相所用溶劑為二氯甲 烷-乙醇或三氯甲烷-甲醇。

在上述長春堿類生物堿的分離純化方法中，步驟(2)高效液相 色譜分離是將預處理制品先用1～2倍二氯甲烷或三氯甲烷溶解，過 濾后進樣，將流動相加至色譜柱中進行洗脫，控制流速40～50ml/min， 柱壓保持在80～100bar，通過檢測器跟蹤分離情況，薄層層析檢測， 收集富含生物堿流份。

在上述長春堿類生物堿的分離純化方法中，步驟(3)中所述低 級脂肪醇優(yōu)選為甲醇、乙醇、丙醇及其混合溶液。

與現有技術相比，本發(fā)明具有如下有益效果：