[發(fā)明專利]基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)的甲型肝炎病毒基因快速診斷試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910041358.8
• 申請日: 2009-07-24
• 公開（公告）號: CN101660005A
• 公開（公告）日: 2010-03-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹以誠;黃逸男;李志勇;杜正平;陳洵;譚惠媚;王志強(qiáng)
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州華峰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 陳 衛(wèi)

1.基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)的甲型肝炎病毒基因快速診斷試劑盒，其特征在于由兩對引物、Bst?DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、穩(wěn)定液、反應(yīng)液、顯色液和陽性對照液組成，以上八種液體分別置于容器中，

上述兩對引物為：

外引物F3，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；

外引物B3，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；

內(nèi)引物FIP，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示；

內(nèi)引物BIP，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示；

上述反應(yīng)液含有1.6～2mmol/L?dNTP、20～25mmol/L?Tris-Cl、10～12.5mmol/L氯化鉀、10～12.5mmol/L硫酸銨、8～10mmol/L硫酸鎂、0.1～0.125％TritonX-100、0.8～1mol/L甜菜堿、內(nèi)引物FIP/BIP各1.6～2mol/L和外引物F3/B3各0.2～0.25mol/L；

上述陽性對照為攜帶甲型肝炎病毒基因的質(zhì)粒DNA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述顯色液為SYBR?Green?I或EvaGreen。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述反應(yīng)液含有2mmol/LdNTP、25mmol/L?Tris-Cl、12.5mmol/L氯化鉀、12.5mmol/L硫酸銨、10mmol/L硫酸鎂、0.125％TritonX-100、1mol/L甜菜堿、內(nèi)引物FIP/BIP各2mol/L和外引物F3/B3各0.25mol/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述穩(wěn)定液為石蠟油。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述逆轉(zhuǎn)錄酶為AMV逆轉(zhuǎn)錄酶。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于所述顯色液為SYBR?Green?I或EvaGreen。