[發(fā)明專利]用于檢測甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒的核酸納米金生物傳感器

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910040975.6
• 申請日: 2009-07-08
• 公開（公告）號: CN101942387A
• 公開（公告）日: 2011-01-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曾令文;頓博影;劉國東
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒核酸快速檢測方法及檢測產(chǎn)品。

背景技術(shù)

流行性感冒簡稱流感，是由甲型、乙型、丙型三種流感病毒引起的急性呼吸道傳染病。其中，甲型流感病毒的宿主最廣、危害最大，人、禽、畜都是甲型流感病毒的宿主。根據(jù)其表面結(jié)構(gòu)(血凝素H和神經(jīng)氨酸酶N)及其基因特性的不同，甲型流感病毒又可分成許多亞型，至今甲型流感病毒已發(fā)現(xiàn)的血凝素有16個亞型(H1-H16)，神經(jīng)氨酸酶有9個亞型(N1-N9)。

2009年從墨西哥爆發(fā)并蔓延到全球多個國家的人感染甲型H1N1流感疫情，是由于一種新變異的甲型H1N1流感病毒引發(fā)的，被世界衛(wèi)生組織稱為“國際關(guān)注的突發(fā)公共衛(wèi)生事件”，已達(dá)到了最高的6級警告標(biāo)準(zhǔn)。

今年流行的甲型H1N1流感是甲型流感病毒中的一個亞型，已經(jīng)蔓延到世界許多國家，不足一個月，全球確診的甲型H1N1流感病例已突破萬例，我國也出現(xiàn)了多例輸入性流感病例。給人類生命安全造成了一定危害，包括我國政府在內(nèi)的世界各國都采取了積極有效的防控措施，以防止疾病的迅速蔓延。面對突然爆發(fā)的流行性疾病，開展對疾病預(yù)防、診斷、致病機理以及治療研究是相關(guān)領(lǐng)域關(guān)注和研究的重點。

甲型流感病毒是RNA病毒，傳統(tǒng)的基因檢測技術(shù)有Northern雜交、Southern雜交、Western?blotting、PCR等，這些檢測方法不僅費時費力，而且特異性差。在過去的十幾年中，實時熒光定量PCR已經(jīng)發(fā)展成為一種重要的基因檢測技術(shù)，具有高靈敏度和特異性，但是需要昂貴的儀器及專業(yè)人員的操作。近年來興起的DNA納米技術(shù)是以DNA堿基嚴(yán)格互補配對的特性為原理，主要應(yīng)用于分子的組裝，產(chǎn)生有功能的組裝聚集物。DNA納米技術(shù)包括基因芯片之外，還有一種是將DNA結(jié)合到納米顆粒上構(gòu)成納米顆粒基因探針，通過與靶DNA之間的互補實現(xiàn)納米顆粒的組裝，這已成為一種新型的DNA檢測系統(tǒng)。Mirkin等運用金納米顆粒基因探針與合成靶雜交，形成透射電鏡下明顯的聚集體，可判斷合成靶存在與否(Chad?A.Mirkin，R.L.L.，Robert?C.Mucic&JamesJ.Storhoff?Nature?1996，382，607-609)。Wang等制備金納米顆粒乙型肝炎病毒(HBV)DNA基因探針，在玻片上目視化檢測HBV?DNA的多聚酶鏈反應(yīng)產(chǎn)物(Wang?YF，Pang?DW，Zhang?ZL，et?al.Visual?gene?diagnosis?of?HBV?and?HCVbased?on?nanoparticle?p?robe?amp?lification?and?silver?staining?enhancement.J?MedVirol，2003，70：2052211)。習(xí)東等應(yīng)用Fe3O4(核)/Au(殼)納米顆粒HBV?DNA基因探針，通過尼龍膜上斑點雜交或液相中雜交研究其在檢測HBV?DNA中的應(yīng)用(Dong?Xia，X.L.，Qin?Ninga，Qianghua?Lud，Kailun?Yao，Zuli?Liud?Journalof?Nanjing?Medical?University?2007，21，207-212)。但上述檢測技術(shù)都存在各自的缺點，如Mirkin的技術(shù)需要復(fù)雜昂貴的透射電鏡，Wang需要昂貴的進(jìn)口玻片，且需要長時間的預(yù)雜交、雜交洗滌過程，習(xí)東的檢測時需要長時間的復(fù)雜的預(yù)雜交、雜交、洗膜銀染過程，沒有技術(shù)優(yōu)點耗時費力，且都處于試驗研究階段，沒有產(chǎn)品化。所以仍然需要尋找快速、靈敏、低成本、操作簡易的核酸檢測工具。為配合這一研究，研究了能迅速準(zhǔn)確檢測甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒的核酸納米金生物傳感器的檢測方法及開發(fā)了其試劑盒，對于早期大規(guī)模篩查及有效地控制疾病的迅速傳播具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒檢測技術(shù)及產(chǎn)品存在的問題和不足，提供一種用于快速檢測甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒(2009年流行的新變種)的核酸納米金生物傳感器。