[發明專利]用于檢測甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒的核酸納米金生物傳感器

無效

• 申請號: 200910040975.6
• 申請日: 2009-07-08
• 公開（公告）號: CN101942387A
• 公開（公告）日: 2011-01-12
• 發明（設計）人: 曾令文;頓博影;劉國東
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

1.一種用于檢測甲型流感病毒的核酸納米金生物傳感器，其特征在于：包括從左到右依次固定于膠板上的樣品墊、玻璃纖維、硝酸纖維素膜和吸水紙；

所述玻璃纖維上涂有納米金標記寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針是由巰基修飾并與膠體金偶聯形成的，該寡核苷酸探針包含如SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列；

所述硝酸纖維素膜上固定有兩種寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針是用生物素標記并與鏈霉親和素偶聯形成的；固定于靠近吸水紙一端的寡核苷酸探針形成質控線，該寡核苷酸探針包含如SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列；固定于靠近玻璃纖維一端的寡核苷酸探針形成檢測線，該寡核苷酸探針包含如SEQ?IDNO.1所示的核苷酸序列。

2.一種用于檢測甲型H1N1流感病毒的核酸納米金生物傳感器，其特征在于：包括從左到右依次固定于膠板上的樣品墊、玻璃纖維、硝酸纖維素膜和吸水紙；

所述玻璃纖維上涂有納米金標記寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針是由巰基修飾并與膠體金偶聯形成的，該寡核苷酸探針包含如SEQ?ID?NO.7所示的核苷酸序列；

所述硝酸纖維素膜上固定有兩種寡核苷酸探針，該寡核苷酸探針是用生物素標記并與鏈霉親和素偶聯形成的；固定于靠近吸水紙一端的寡核苷酸探針形成質控線，該寡核苷酸探針包含如SEQ?ID?NO.8所示的核苷酸序列；固定于靠近玻璃纖維一端的寡核苷酸探針形成檢測線，該寡核苷酸探針包含如SEQ?IDNO.6所示的核苷酸序列。

3.根據權利要求1或2所述的核酸納米金生物傳感器，其特征在于：所述質控線與檢測線相距3-10mm；所述固定于膠板上的樣品墊、玻璃纖維、硝酸纖維素膜和吸水紙的相鄰部分彼此重疊1-5mm；所述膠體金的粒徑為8-100nm。

4.含有如權利要求1所述的核酸納米金生物傳感器的用于檢測甲型流感病毒的試劑盒。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，還包括：RT-不對稱PCR反應試劑，包含：10倍RT-PCR緩沖液、鎂離子、酶混合液、RNA酶抑制劑、上游引物、下游引物；其中，上游引物含有如SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列，下游引物含有如SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列；所述酶混合液是由Taq酶5U/μl和逆轉錄酶5U/μl以體積比1∶1混合組成。

6.含有如權利要求2所述的核酸納米金生物傳感器的用于檢測甲型H1N1流感病毒的試劑盒。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，還包括：RT-不對稱PCR反應試劑，包含：10倍RT-PCR緩沖液、鎂離子、酶混合液、RNA酶抑制劑、上游引物、下游引物；其中，上游引物含有如SEQ?ID?NO.9所示的核苷酸序列，下游引物含有如SEQ?ID?NO.10所示的核苷酸序列；所述酶混合液是由Taq酶5U/μl和逆轉錄酶5U/μl以體積比1∶1混合組成。

8.根據權利要求5或7所述的試劑盒，其特征在于：所述上游引物與下游引物之間的濃度比為10∶1-100∶1。