[發(fā)明專利]桑葉γ-氨基丁酸的提取方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910040513.4
• 申請(qǐng)日: 2009-06-24
• 公開（公告）號(hào): CN101633623B
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林健榮;陳恒文;鐘楊生;王葉元;廖富蘋;藍(lán)年新
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07C229/08
• 分類號(hào): C07C229/08;C07C227/28;A61K31/197;A61P3/02;A61P43/00;A23L1/305
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 林麗明

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及桑葉生物活性物質(zhì)γ-氨基丁酸的的提取方法與應(yīng)用。?

背景技術(shù)

γ-氨基丁酸(GABA)是一種功能性的非蛋白質(zhì)氨基酸。自Stewatd等(1949)首次在土豆莖塊中發(fā)現(xiàn)之后，Roberts和Udenfriend在1950年也分別在哺乳動(dòng)物大腦中發(fā)現(xiàn)了GABA的存在，隨后的研究表明，GABA分布廣泛，在動(dòng)物、植物和微生物中均有存在，是哺乳動(dòng)物神經(jīng)中樞的一種抑制性遞質(zhì)，具有重要的生理功能，有調(diào)節(jié)血壓、促使精神安定、促進(jìn)腦部血流、增進(jìn)腦活力、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞、健肝利腎等多種功效。臨床醫(yī)學(xué)的研究認(rèn)為，GABA對(duì)改善動(dòng)物的生理代謝有著重要的活性功能，能有效改善腦血流通，增加氧的供給，促進(jìn)腦的代謝功能和提高生物機(jī)體的免疫能力，且具有抑制抗利尿荷爾蒙激素的分泌，擴(kuò)張血管，降低血壓，防止動(dòng)脈硬化的作用，在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育過(guò)程中具有營(yíng)養(yǎng)作用，是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，應(yīng)用前景廣闊。隨著對(duì)GABA生理功能的深入了解，它被作為一種新型的功能性因子越來(lái)越引起醫(yī)藥、食品、化工、農(nóng)業(yè)等行業(yè)的關(guān)注，成為開發(fā)研究的熱點(diǎn)。?

自古以來(lái)，作為藥食同源的桑葉，它除用作養(yǎng)蠶之外，早被人們用于治療疾病和作為保健品的藥膳用材料，如具有清熱解毒功能的夏?桑菊中藥制劑，其主成分之一就是桑葉。桑樹在我國(guó)大部分地區(qū)可以種植，尤其是廣東廣西，全年生長(zhǎng)時(shí)間長(zhǎng)，有栽培容易成本低的資源優(yōu)勢(shì)，全國(guó)現(xiàn)有桑田約75萬(wàn)公頃，高產(chǎn)的桑田每公頃產(chǎn)量約45～50噸，故對(duì)桑葉GABA進(jìn)行研究并加以開發(fā)利用，這不僅挖掘、發(fā)展一種新的GABA生物新材料，而且對(duì)我國(guó)桑葉在非絹絲產(chǎn)業(yè)上的利用是一種創(chuàng)新，將有十分重要的科學(xué)價(jià)值和廣闊的市場(chǎng)前景。?

申請(qǐng)?zhí)枮?00410089069.2的中國(guó)專利公開了一種從桑葉中提取γ-氨基丁酸化合物的方法。以鮮桑葉為原料，通過(guò)烘前處理、真空烘燥、浸泡與濃縮、樹脂分離與富集四大工序，得到含有γ-氨基丁酸化合物的桑葉提取物。該技術(shù)需要對(duì)桑葉進(jìn)行費(fèi)時(shí)耗能的烘前處理步驟，提取過(guò)程也比較繁瑣，浸泡需要加熱，容易對(duì)γ-氨基丁酸造成破壞，能耗高、產(chǎn)率低，而且得到的γ-氨基丁酸是一種混和物，純度只能達(dá)到70％左右，不適合作為食品的添加劑或醫(yī)藥衛(wèi)生使用的藥物原料，不利于大規(guī)模應(yīng)用生產(chǎn)。?

如何改進(jìn)從桑葉中提取γ-氨基丁酸化合物的方法和提取條件，獲得更高純度的γ-氨基丁酸并研究其活性，對(duì)桑葉γ-氨基丁酸的開發(fā)應(yīng)用十分重要。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服桑葉γ-氨基丁酸提取工藝的不足，提供一種簡(jiǎn)單、高效和得到高純度產(chǎn)品的桑葉γ-氨基丁酸的提取方法。?

本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供所述γ-氨基丁酸的應(yīng)用。?

本發(fā)明目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：?

提供一種桑葉γ-氨基丁酸的提取方法，包括以下步驟：?

(1)桑葉干燥后進(jìn)行粉碎；?

(2)取干桑葉粉加水浸泡，超聲波-微波協(xié)同萃取，收集萃取上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮制得γ-氨基丁酸粗提液；?

(3)γ-氨基丁酸粗提液經(jīng)無(wú)水乙醇沉淀去除部分雜蛋白和多糖類物質(zhì)，再經(jīng)三級(jí)分離純化制得γ-氨基丁酸白色結(jié)晶體。?

步驟(1)所述桑葉干燥是采摘桑葉葉片，包括桑葉嫩葉或成熟葉，用清水沖洗干凈，晾干，置于烘箱中在83～87℃烘28～32min后降溫至63～67℃烘4～4.5h，干燥后的樣品進(jìn)行粉碎，過(guò)40目篩，裝袋密封后低溫(5～0℃)保存?zhèn)溆谩?

步驟(2)所述加水浸泡是取干桑葉粉加水浸泡，按照桑葉粉重量克數(shù)(g)：水體積毫升數(shù)(mL)為1∶30～1∶35的比例加水，浸泡13～17min；所述萃取是將浸泡液置于微波144W、超聲波50W的條件下進(jìn)行常規(guī)超聲波-微波協(xié)同萃取，萃取時(shí)間為160～170秒，萃取液通過(guò)離心去沉淀，收集上清液，按照常規(guī)方法旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。?

步驟(3)包括以下步驟：?

A用無(wú)水乙醇沉淀法去除部分雜蛋白和多糖類物質(zhì)；?

B用大孔樹脂S-8進(jìn)行一級(jí)分離純化；?

C用葡聚糖凝膠G-10進(jìn)行二級(jí)分離純化；?

D用732磺酸型陽(yáng)離子樹脂進(jìn)行三級(jí)分離純化；?

E將經(jīng)過(guò)三級(jí)分離純化后的桑葉γ-氨基丁酸產(chǎn)物經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和冷凍干燥進(jìn)行濃縮，獲得結(jié)晶。?

其中：?

步驟A：沉淀法去除部分雜蛋白和多糖類物質(zhì)?

取粗提液，按體積比1∶2倍量加入無(wú)水乙醇，過(guò)夜，在3000r/min離心10min，棄沉淀，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮；?