[發明專利]動物華支睪吸蟲病特異性檢測引物、檢測方法和檢測試劑盒

無效

• 申請號: 200910040394.2
• 申請日: 2009-06-19
• 公開（公告）號: CN101586161A
• 公開（公告）日: 2009-11-25
• 發明（設計）人: 朱興全;林瑞慶;唐劍棟;宋慧群;鄧艷;袁子國
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司
• 代理人: 陳 衛

1、一種動物華支睪吸蟲病特異性檢測引物，其上游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

2、一種動物華支睪吸蟲病特異性檢測方法，其特征在于該方法包括如下步驟：

(1)華支睪吸蟲囊蚴DNA的提取或蟲卵DNA的提取；

(2)用權利要求1所述特異性檢測引物采用常規PCR技術進行擴增；

(3)擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳后，紫外光下觀察特異性擴增條帶，即可判斷樣品中是否含有動物華支睪吸蟲病。

3、根據權利要求2所述特異性檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中，PCR擴增條件為94℃預變性5分鐘；94℃變性30秒、61℃退火30秒、72℃延伸30秒，30個循環；72℃后延伸5分鐘。

4、根據權利要求2所述特異性檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中，PCR擴增體系為：總體系2.5ml，含有權利要求1所述動物華支睪吸蟲病特異性檢測引物各0.5pmol/μl、10mM的pH8.3的Tris-HCl、50mM的KCl、4個dNTP各200μM、2.5mM的MgCl₂和0.625U的Taq?DNA聚合酶。

5、一種動物華支睪吸蟲病特異性檢測試劑盒，其特征在于該試劑盒包括如下部分：

a.PCR反應液：總2.5ml，含有權利要求1所述動物華支睪吸蟲病特異性檢測引物各0.5pmol/μl、10mM的pH8.3的Tris-HCl、50mM的KCl、4個dNTP各200μM和2.5mM的MgCl₂；

b.陽性對照品：華支睪吸蟲陽性DNA，100μl；

c.陰性對照品：無DNA超純水，100μl。

6、根據權利要求5所述檢測試劑盒，其特征在于該試劑盒還包括Taq?DNA聚合酶，5U/μl，12.5μl。

7、根據權利要求5所述檢測試劑盒，其特征在于該試劑盒還包括如下部分：

DNA裂解液30ml：含有100mM的NaCl、10mM的pH8.0的Tris-Cl、25mM的pH8.0的EDTA、1％W/V的十二烷基磺酸鈉和1.7μg/μL的蛋白酶K。