[發明專利]象鼻蘭的種苗試管繁殖方法

無效

• 申請號: 200910039929.4
• 申請日: 2009-06-02
• 公開（公告）號: CN101584298A
• 公開（公告）日: 2009-11-25
• 發明（設計）人: 段俊;陳之林;曾宋君;吳坤林
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00
• 代理公司: 廣州科粵專利代理有限責任公司
• 代理人: 余炳和;李繼蘭

技術領域

本發明涉及植物的種苗繁殖方法，具體地說，涉及象鼻蘭的種苗試管繁殖方法。

背景技術

象鼻蘭(Nothodoritis?zhejiangensis?Z.H.Tsi)屬于蘭科象鼻蘭屬，本屬中僅此1種，主要分布于我國浙江臨安天目山和寧波等地，生于海拔350-900米的山地林中或林緣樹枝上，形態上與五唇蘭(Doritis)和與蝴蝶蘭(Phalaenopsis)相似，但其萼片和花瓣白色，內具紫色橫紋，非常艷麗和獨特。也是國內少數沒有流失到國外的珍貴蘭科種質資源之一。

由于生態環境的破壞，象鼻蘭的野生資源越來越少，而由于象鼻蘭種子胚發育不完全，自然狀態下極難萌發，目前，國內外也還沒有象鼻蘭種苗繁殖方法的報道，因此，研究和開發能培育大量象鼻蘭種苗的試管繁殖方法，對于減少對野生資源的進一步挖掘，滿足市場的需要，進行回歸自然的生態重建，具有重大意義和廣闊的應用前景。

發明內容

本發明的目的是提供一種能在短期內獲得大量的試管苗的高效率的象鼻蘭的種苗試管繁殖方法。

本發明所提出的象鼻蘭的種苗試管繁殖方法，包括以下的步驟：

(1)材料：選取生長健壯的象鼻蘭母株，于開花時進行人工授粉，將授粉后發育至基本成熟而未開裂時的果實做為外植體用于播種；

(2)無菌播種或原球莖的增殖并分化培養：

a、無菌播種：將所述外植體用70％-80％的酒精浸泡30-60秒后置于0.1％-0.2％的升汞溶液中消毒10-20分鐘，再用無菌水漂洗4～5次后切開果實，將其粉末狀胚接種培養到種子萌發培養基上，所述的種子萌發培養基為改良的Knudson?C培養基附加體積百分比5％-10％的椰子汁，其中改良的Knudson?C培養基每升含硫酸銨400-600mg，磷酸二氫鉀200-300mg，硫酸鎂200-300mg，硝酸鈣500-1500mg，硫酸錳5-10mg，硫酸亞鐵20-40mg，蔗糖15～30g，瓊脂6～7g，活性炭0.5～2g，肌醇80-120毫克，甘氨酸1.5-2.5毫克，鹽酸硫胺素(VB1)0.05-0.2毫克，鹽酸吡哆醇(VB6)0.4-0.8毫克，煙酸0.4-0.8毫克，余量為水，pH?5.4-5.6；

b、原球莖的增殖并分化培養：將原球莖培養在所述的改良Knudson?C培養基附加體積百分比5％-10％的椰子汁再附加TDZ?0.01-0.2毫克/升的培養基上，在原球莖上獲得大量的類原球莖或/和愈傷組織，再將這些類原球莖或/和愈傷組織培養在改良的Knudson?C培養基附加體積百分比5％-10％的椰子汁再附加活性炭0.5～2g/升的培養基上，分化出小苗，所述的改良的Knudson?C培養基的組分如步驟(2)a中所述；

(3)壯苗培養：將在上述無菌播種培養所得的小植株或通過原球莖增殖并分化而得的小苗接種培養到壯苗培養基上，所述的壯苗培養基每升含花寶1號1～3g，蛋白胨0.5～3g，萘乙酸0.5-3mg、香蕉勻漿50-100g、活性炭0.5～2g，蔗糖15～30g，瓊脂6～7g，肌醇80-120毫克/升，甘氨酸1.5-2.5毫克/升，鹽酸硫胺素(VB1)0.05-0.2毫克/升，鹽酸吡哆醇(VB6)0.4-0.8毫克/升，煙酸0.4-0.8毫克/升，pH?5.4-5.6；

(4)試管苗移栽：當植株約3-5厘米高時，將培養瓶轉移到自然光下煉苗10-15天，然后將其從培養瓶中取出，洗凈根部的培養基，移入蘭石∶蕨根∶泥炭為1∶0.5～2∶0.5～2的混合基質中；

上述步驟(2)～(3)中培養條件為培養溫度24-28℃，光照度1500～2000l?x，光照12-16小時/天。

步驟(1)所述的果實成熟期通常為90-120天。

在原球莖的增殖并分化培養步驟[即步驟(2)b]中，當用于培養原球莖的培養基所附加的TDZ的濃度小于0.05毫克/升時，在原球莖上能增殖形成大量的類原球莖(即主要增殖類原球莖)；當用于培養原球莖的培養基所附加的TDZ的濃度大于0.05毫克/升時，在原球莖上能形成大量的愈傷組織(即主要形成愈傷組織)。

步驟(3)所述的花寶1號可以從市場上購得。

本發明具有種子的萌發率高、成苗快、種苗品質好、成本低廉等特點，能在短期內獲得大量的試管苗，成苗的移栽成活率90％以上。能為象鼻蘭的種苗生產提供一條有效的途徑。

具體實施方式