[發明專利]草魚細菌性爛鰓、敗血、赤皮三聯滅活疫苗及其制備方法

無效

• 申請號: 200910039862.4
• 申請日: 2009-05-31
• 公開（公告）號: CN101574516A
• 公開（公告）日: 2009-11-11
• 發明（設計）人: 白岳強;許淑英;江小燕;鄧國成;羅霞;黃志斌
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: A61K39/116
• 分類號: A61K39/116;A61K39/02;A61P31/04;C12N1/20;C12R1/38;C12R1/01
• 代理公司: 廣州市深研專利事務所
• 代理人: 陳雅平

1.一種草魚細菌性爛鰓、敗血、赤皮三聯滅活疫苗，包括抗原和佐劑，其特征在于所述抗原為如下抗原組合物：柱狀屈橈桿菌培養物、嗜水氣單胞菌培養物、螢光極毛桿菌培養物。

2.權利要求1所述一種草魚細菌性爛鰓、敗血、赤皮三聯滅活疫苗，其特征在于所述佐劑為MONTANIDE?ISA?763AVG和白油。

3.權利要求2所述一種草魚細菌性爛鰓、敗血、赤皮三聯滅活疫苗，其特征在于所述組分按體積百分比計如下：

柱狀屈橈桿菌培養物20～30億CFU/ml，30～39％，

嗜水氣單胞菌培養物80億CFU/ml，8％，

螢光極毛桿菌培養物80億CFU/ml，10％，

MONTANIDE?ISA?763A?VG?14％，

白油10％。

4.一種草魚細菌性爛鰓、敗血、赤皮三聯滅活疫苗的制備方法，包括以下步驟：將柱狀屈橈桿菌培養物，嗜水氣單胞菌培養物、螢光極毛桿菌培養物按比例混合，加入生理鹽水攪拌均勻后，加入MONTANIDE?ISA?763AVG和白油混合佐劑，充分混勻后乳化成爛鰓、敗血、赤皮三聯滅活疫苗。

5.權利要求4所述一種草魚細菌性爛鰓、敗血、赤皮三聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于所述柱狀屈橈桿菌培養物的制備包括以下步驟：

a菌種復蘇、復壯：將凍干菌種啟封后，接入液體胰蛋白胨培養基培養；

b種子鑒定及擴大培養：取培養菌種，劃線接種于胰蛋白胨瓊脂平板，28℃培養48h，挑取至少5個假樹根狀菌落，接種于胰蛋白胨液體培養基，置28℃擴大培養成菌種；

c制苗菌液培養：將檢驗合格的菌種按胰蛋白胨培養基量2％接種到培養罐，以恒溫28℃、6M²/h的通氣量培養20～24h收獲20～30億CFU/ml培養物；

d滅活：按細菌培養物體積比(V/V)加入終濃度為0.02％的硫柳汞溶液，30℃滅活2天。

6.權利要求4所述一種草魚細菌性爛鰓、敗血、赤皮三聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于所述嗜水氣單胞菌培養物的制備包括以下步驟：

a菌種復蘇、復壯：用少許蛋白胨培養基將凍干的嗜水氣單胞菌稀釋后，接種于蛋白胨培養基培養；

b種子鑒定及擴大培養：取復壯種子劃線接種于蛋白胨瓊脂平板若干個，置28℃培養48h，挑取單個形成圓整、隆起、平滑和透明的菌落，由灰白至淡黃色，并有特殊氣味，不產色素的菌落至小5個，接種于蛋白胨培養基，28℃下擴大培養成菌種；

c制苗菌液培養：將檢驗合格的種子按培養基量2％接種量接種置種子罐，以恒溫28℃、40L/min的通氣量，攪拌培養20h，再接種置發酵罐，10M³/h通氣量，攪拌培養20h，收獲80億CFU/ml以上培養物；

d滅活：加入甲醛溶液，使其終濃度為0.2％，37℃滅活2天。

7.權利要求4所述一種草魚細菌性爛鰓、敗血、赤皮三聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于所述螢光極毛桿菌培養物的制備包括以下步驟：

a菌種復蘇、復壯：用少許蛋白胨培養基將凍干螢光極毛桿菌種稀釋后，接種于蛋白胨培養基培養；

b種子鑒定及擴大培養：取復壯的種子，劃線接種于蛋白胨瓊脂平板若干個培養，挑取置28℃培養48h，挑取單個圓形微凸，表面光滑，邊緣整齊，灰白色或黃白色菌落至少5個，接種于蛋白胨液體培養基，28℃，擴大培養成菌種；

c制苗菌液培養：將檢驗合格的種子按蛋白胨培養基量2％接種量接種置種子罐，以恒溫28℃、40L/min通氣量，攪拌培養后20h，再接種置發酵罐，10M³/h通氣量，拌攪培養20h收獲80億CFU/ml以上培養物；

d滅活：加入甲醛溶液，甲醛溶液最終濃度為0.24％，37℃，滅活3天。