[發明專利]一種藻菌混合微生物制劑及其制法和應用

無效

• 申請號: 200910039771.0
• 申請日: 2009-05-27
• 公開（公告）號: CN101560484A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發明（設計）人: 黨志;唐霞;何麗媛;易筱筠
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/12;C02F3/34;C12R1/89;C12R1/38;C12R1/01;C02F101/32
• 代理公司: 廣州粵高專利代理有限公司
• 代理人: 何淑珍

技術領域

本發明屬于環境有機污染物生物處理技術領域，具體涉及一種藻菌混合微生物制劑及其制法和應用。

背景技術

石油作為一種非常重要的能源在世界范圍被廣泛使用，由其帶來的污染越來越嚴重。據不完全統計，每年通過各種渠道泄入水體的石油和石油產品約占全球石油總產量的0.5％，約為200～1000萬噸。我國近海水域水質含油量超過國家規定2～8倍，污染狀況十分嚴峻。

石油是一種復雜的多組分混合物，其主要組成是烴類(烷烴和芳烴等)。其中PAHs(多環芳烴)是毒性很強的物質，除可影響水生生物生理、繁殖與行為外，甚至可直接觸殺水生生物。PAHs等大多屬于憎水性的持久性有機污染物(POPs)，在環境中難以被降解，一方面易富集于水生生物的組織和器官中，長期釋放其毒性，另一方面可通過食物鏈進入人體，對人類健康造成嚴重危害。

生物修復技術因其具有無二次污染、處理費用低等優點，在石油污染治理方面逐漸成為核心。近年來，國內外學者在此領域做了大量研究，發現細菌中降解石油的屬有假單胞菌屬、黃桿菌屬、棒狀桿菌屬、無色桿菌屬、節桿菌屬、不動桿菌屬、小球菌屬等菌等。

目前大部分研究工作篩選的單一石油降解菌只能利用石油中一種或幾種烴類；同時，石油中各組分完全生物氧化需要消耗大量的氧，據測算1克石油被微生物礦化需要3～4克氧，而1升石油，則需要消耗40萬升水體中的溶解氧。在石油污染嚴重的水域，氧可能成為石油降解的限制因子。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺點，提供一種藻菌混合微生物制劑及其制法和應用，本發明針對上述現有水體石油污染生物修復技術所面臨的問題，設計降解機理互補、協同作用好的混合菌劑，同時利用藻提供O₂，解決污染水域供氧不足問題。

本發明目的通過以下技術方案來實現：

一種藻菌混合微生物制劑，由無菌純柵藻、烷烴降解菌GS3C(Burkholderia?cepacia)、菲高效降解菌GY2B(sphingomonas)、芘降解菌GP3：GP3A(Pseudomonas)，GP3B(Pandoraeapnomenusa)組成；所述無菌純柵藻是由柵藻除菌純化后得到。

三種石油組分降解菌株為本課題組前期工作分離篩選所得，已經對其進行菌種鑒定，提交16SrDNA序列號至GenBank，并在中國典型培養物保藏中心(CCTCC)保藏。菲高效降解菌GY2B(sphingomonas)，GenBank登錄號DQ139343，保藏編號為CCTCC?M?206019；芘降解菌GP3：GP3A(Pseudomonas)，GenBank登錄號為EU233280，保藏編號為CCTCC?NO：M?207166；GP3B(Pandoraea?pnomenusa)的登錄號為EU233279，保藏編號為CCTCC?NO：M207167；烷烴降解菌GS3C(Burkholderia?cepacia)，登錄號為EU282110，保藏編號為CCTCCM207169。

所述的一種藻菌混合微生物制劑的制備方法，包括以下步驟

(1)利用平板分離法得到單種柵藻；

(2)用溶菌酶緩沖液對柵藻進行預處理；

(3)利用抗生素對柵藻進行除菌，得到無菌純柵藻；

(4)微生物接種量為：純柵藻與總石油組分降解菌按照2∶1體積比例接種培養基，總石油組分降解菌為GS3C、GY2B、GP3A和GP3B按照等體積比混合；

(5)擴大培養條件：培養基為BG11培養液，在溫度為25±1℃，轉速150rmp的光照搖床培養，光照強度為8000LX，光暗比L/D＝14∶10，將接種后的培養液擴大培養培養7～10天，即得本發明的藻菌混合微生物制劑。

所述的溶菌酶緩沖液中Tween80濃度為0.005mol/l，EDTA濃度為0.1mol/l，SDS濃度為0.25mol/l，溶菌酶濃度為0.5mg/ml。

所述的預處理為在柵藻中加入溶菌酶緩沖液放置10分鐘后，離心倒掉上清液，加入滅菌蒸餾水重復洗滌三次；

所述的抗生素為青霉素、鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、利福平和四環素中的一種以上。

優選青霉素+慶大霉素組合，能將柵藻所帶細菌全部去除而得到無菌柵藻。

所得柵藻形態學特征為：藻細胞為真性定形群體，扁平，4個細胞為一組，群體細胞并排成一列，細胞紡錘形，上下兩端逐漸尖細，群體兩側細胞凸出，細胞壁平滑。