[發明專利]生物纖維蛋白膠指紋圖譜的建立方法及標準指紋圖譜

有效

• 申請號: 200910038532.3
• 申請日: 2009-04-10
• 公開（公告）號: CN101526507A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發明（設計）人: 李吉來;黃星;肖尚志;向春;江彩霞;潘小寧
• 申請（專利權）人: 廣州倍繡生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司
• 代理人: 羅毅萍;周端儀

技術領域

本發明涉及生物制品的質量控制方法，具體涉及生物纖維蛋白膠高效液相色譜(HPLC) 指紋圖譜的構建方法和得到的標準指紋圖譜。

背景技術

現代外科手術中，創口止血和愈合是一個需要能有效解決的問題，傳統的方法一般使 用結扎、縫合和電凝進行止血。傳統縫合易導致針眼感染和滲漏，脆性較大的組織撕拉極 易造成組織破壞；電凝會增加組織破壞，造成組織壞死。因此，長期以來科學家們致力于 尋找一種既能快速有效止血，又能促進組織愈合的新型止血材料。纖維蛋白封閉劑(FS) 應運而生，它的出現正好滿足了這種外科手術的需求。

纖維蛋白封閉劑是一種從血液中提取的新型生物止血材料。其作用機制是模擬了人體 自身凝血反應最后階段，由纖維蛋白單體聚合形成具有三維立體網狀結構的膜，能夠有效 的網絡住紅細胞和創面滲液，起到止血防滲、促進愈合的作用。并且因為是生物材料制品， 具有良好的組織相容性，安全無毒副作用；在人體自身酶作用下，術后兩周可自動降解吸 收，大大縮短了住院時間，減輕病患痛苦。

目前，國外同類產品以人血為原料，本申請人首創開發出以豬血為原料的產品，避免 了人血制品所帶來的艾滋病、肝炎等血液傳染病傳播的危險。同時豬血資源豐富，豬的基 因序列同人的基因序列極為相似，而攜帶人類的傳染性疾病傳播風險極小，極大的降低了 成本，使產品具有很強的市場競爭力。但生物纖維蛋白膠為蛋白質、多肽及無機鹽組成， 而該類產品目前質量控制在蛋白含量及純度等技術指標方面水平較低，產品的蛋白含量多 為以總氮量測定來反映總蛋白含量，對具體蛋白的分子數量及各分子的相對含量均不清 楚，產品缺乏較為準確的量化數據。

有關生物纖維蛋白膠的質量研究報導不多，特別是能從高效液相色譜的整體特征面貌 上把握生物纖維蛋白膠的品種和質量情況未見報導。

發明內容

為了有效地控制生物纖維蛋白膠質量，本發明的目的是提供一種生物纖維蛋白膠指紋 圖譜的建立方法及標準指紋圖譜，為生物纖維蛋白膠質量控制和產品真偽鑒別提供一種全 新的方法。

本發明的目的是這樣實現的：一種生物纖維蛋白膠指紋圖譜的建立方法，包括下列步 驟：

供試品溶液的制備：A、主體膠供試品溶液的制備：取主體膠適量，精密稱重，置量 瓶中，加水或流動相溶解并定容，搖勻，過濾，取續濾液作為主體膠供試品溶液；或B、 催化劑供試品溶液的制備：取生物纖維蛋白膠催化劑適量，精密稱定，置量瓶中，加水或 流動相溶解并定容，搖勻，過濾，取續濾液作為催化劑供試品溶液。

主體膠參照物溶液的制備：取豬血纖維蛋白對照品適量，用水或流動相稀釋，制成主 體膠參照物溶液，理論塔板數以豬血纖維蛋白峰計算并作為主體膠參照物；催化劑參照物 溶液的制備：取豬血白蛋白對照品適量，用水或流動相稀釋，制成催化劑參照物溶液，理 論塔板數以豬血白蛋白峰計算并作為催化劑參照物；

測定：精密吸取各供試品溶液及參照物溶液，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜 法測定，色譜條件：色譜柱采用Protein-Pak^TM300SW分子排阻色譜柱；流動相為20mmol/L 磷酸鈉的水溶液；紫外光190-280nm帶二極管陣列檢測器檢測；并以面積歸一化法計算各 峰的相對峰面積，分別得到生物纖維蛋白膠主體膠指紋圖譜及生物纖維蛋白膠催化劑指紋 圖譜。

所述生物纖維蛋白膠主體膠指紋圖譜中，共有峰有5個，其中超過總峰面積10％的指 紋峰有3個，以豬血纖維蛋白原的色譜峰的相對保留時間為1計算其它色譜峰的相對保留 時間并計算相對峰面積，上述3個指紋峰分別是1號峰豬血纖維蛋白原即參照峰的RT為 1.000，相對峰面積范圍為38.86％～51.64％；2號峰的平均RT為1.456，相對峰面積范圍 為12.27％～15.49％；5號峰的平均RT為2.258，相對峰面積范圍為34.51％～44.64％；所述 生物纖維蛋白膠催化劑指紋圖譜中，共有峰有7個，其中超過總峰面積3％的指紋峰有3 個，以豬血白蛋白的色譜峰的相對保留時間為1計算其它色譜峰的相對保留時間并計算相 對峰面積，上述3個指紋峰分別是4號峰的平均RT為0.865，相對峰面積范圍為 3.45％～11.06％；5號峰豬血白蛋白即參照峰的RT?1.000，相對峰面積范圍為61.34％～89.40 ％；7號峰的平均RT?1.501，相對峰面積范圍為3.01％～5.06％。