[發(fā)明專利]生物纖維蛋白膠指紋圖譜的建立方法及標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200910038532.3
• 申請(qǐng)日: 2009-04-10
• 公開（公告）號(hào): CN101526507A
• 公開（公告）日: 2009-09-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李吉來;黃星;肖尚志;向春;江彩霞;潘小寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州倍繡生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 廣州新諾專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司
• 代理人: 羅毅萍;周端儀

1.一種生物纖維蛋白膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于包括以下步驟：

供試品溶液的制備：A、主體膠供試品溶液的制備：取主體膠適量，精密稱重，置量 瓶中，加水或流動(dòng)相溶解并定容，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為主體膠供試品溶液；或B、 催化劑供試品溶液的制備：取生物纖維蛋白膠催化劑適量，精密稱定，置量瓶中，加水或 流動(dòng)相溶解并定容，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為催化劑供試品溶液；

主體膠參照物溶液的制備：取豬血纖維蛋白原對(duì)照品適量，用水或流動(dòng)相稀釋，制成 主體膠參照物溶液，理論塔板數(shù)以豬血纖維蛋白原峰計(jì)算并作為主體膠參照物；催化劑參 照物溶液的制備：取豬血白蛋白對(duì)照品適量，用水或流動(dòng)相稀釋，制成催化劑參照物溶液， 理論塔板數(shù)以豬血白蛋白峰計(jì)算并作為催化劑參照物；

測(cè)定：精密吸取各供試品溶液及參照物溶液，分別注入液相色譜儀，照高效液相色譜 法測(cè)定，色譜條件：色譜柱采用Protein-Pak^TM300SW分子排阻色譜柱，流動(dòng)相為20mmol/L 磷酸鈉的水溶液，紫外光190-280nm帶二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)；并以面積歸一化法計(jì)算各 峰的相對(duì)峰面積，分別得到生物纖維蛋白膠主體膠指紋圖譜及生物纖維蛋白膠催化劑指紋 圖譜。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物纖維蛋白膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于：所述生 物纖維蛋白膠主體膠指紋圖譜中，共有峰有5個(gè)，其中超過總峰面積10％的指紋峰有3個(gè)， 以豬血纖維蛋白原的色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間為l計(jì)算其它色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間并計(jì)算相 對(duì)峰面積，上述3個(gè)指紋峰分別是1號(hào)峰豬血纖維蛋白原即參照峰的RT為1.000，相對(duì) 峰面積范圍為38.86％～51.64％；2號(hào)峰的平均RT為1.456，相對(duì)峰面積范圍為12.27％～15.49 ％；5號(hào)峰的平均RT為2.258，相對(duì)峰面積范圍為34.51％～44.64％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物纖維蛋白膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于：所述生 物纖維蛋白膠催化劑指紋圖譜中，共有峰有7個(gè)，其中超過總峰面積3％的指紋峰有3個(gè)， 以豬血白蛋白的色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間為l計(jì)算其它色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間并計(jì)算相對(duì)峰 面積，上述3個(gè)指紋峰分別是4號(hào)峰的平均RT為0.865，相對(duì)峰面積范圍為3.45％～11.06 ％；5號(hào)峰豬血白蛋白即參照峰的RT?1.000，相對(duì)峰面積范圍為61.34％～89.40％；7號(hào)峰的 平均RT?1.501，相對(duì)峰面積范圍為3.01％～5.06％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物纖維蛋白膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于：在制 備供試品溶液A時(shí)：加水或流動(dòng)相的量不少于10倍主體膠重量；在制備供試品溶液B時(shí)， 加水或流動(dòng)相的加入量不少于10倍催化劑重量。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物纖維蛋白膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于：所述的 色譜條件中，流動(dòng)相為20mmol/L磷酸鈉的水溶液，流動(dòng)相的流速為0.3ml/min-0.8ml/min； 參照物濃度為每1ml含0.1～2.0mg。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物纖維蛋白膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于：還包括 得到標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的步驟：通過比較10批生物纖維蛋白膠主體膠指紋圖譜及生物纖維蛋 白膠催化劑指紋圖譜色譜圖，由其共有特征峰構(gòu)成的生物纖維蛋白膠主體膠標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜 及生物纖維蛋白膠催化劑標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的生物纖維蛋白膠指紋圖譜的建立方法，其特征在于：所述的 生物纖維蛋白膠主體膠標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，5個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD均 小于3％，1號(hào)峰豬血纖維蛋白即參照峰的RT為1.000，RSD為0.00％，相對(duì)峰面積范圍 為38.86％～51.64％；2號(hào)峰的平均RT為1.456，RSD為0.62％，相對(duì)峰面積范圍為 12.27％～15.49％；3號(hào)峰的平均RT為1.998，RSD為0.63％，相對(duì)峰面積范圍為0.18％～0.48 ％；4號(hào)峰的平均RT為2.135，RSD為0.61％，相對(duì)峰面積范圍為0.22％～0.84％；5號(hào)峰的 平均RT為2.258，RSD為2.94％，相對(duì)峰面積范圍為34.51％～44.64％。