[發明專利]菊花滑刃線蟲的檢測方法及診斷試劑盒

無效

• 申請號: 200910037299.7
• 申請日: 2009-02-20
• 公開（公告）號: CN101812502A
• 公開（公告）日: 2010-08-25
• 發明（設計）人: 崔汝強;劉中勇;胡學難;鐘國強;趙立榮;馮黎霞;孫曉棠;吳海榮;胡佳
• 申請（專利權）人: 崔汝強
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 戴建波

1.一種檢測菊花滑刃線蟲（Aphelenchoides??ritzemabosi）的方法，其包括：

（a）從可疑植物材料或土樣中分離出待檢測線蟲，提取DNA;

（b）以步驟（a）中獲得的DNA為模板，使用SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO:2的引物對，進行聚合酶鏈式反應，得到擴增產物；

（c）檢測步驟（b）中獲得的擴增產物，根據檢測結果判斷菊花滑刃線蟲的存在。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，當所述可疑植物材料或土樣中存在大量線蟲時，采用酚氯仿提取法提取DNA。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，當所述可疑植物材料或土樣只存在單條線蟲時，步驟（a）中所述的提取包括以下步驟：

（1）將單條線蟲加入含有WLB溶液的管中；

（2）于-70℃放置30-60?min；95℃放置15-20?min；55-65℃放置2min；

（3）再加入蛋白酶K，55-65℃處理30?min-2?h；95℃處理15-20min，以獲得作為單條線蟲DNA模板的產物。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物材料為菊科植物材料、茄科植物材料或罌粟科植物材料。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物材料為煙草、草莓、珠蘭、百合、蒲包花、飛燕草或夾竹桃的種苗或植株。

6.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟（c）中所述檢測步驟（b）中獲得的擴增產物的方法為電泳檢測。

7.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述菊科植物為翠菊、金光菊、大麗菊或百日草。

8.一種用于診斷菊花滑刃線蟲病的試劑盒，其包含SEQ?ID?NO:1和SEQ?ID?NO:2的引物對。