[發明專利]混合溶劑中酶促5-氮雜胞苷酯衍生物合成的方法

無效

• 申請號: 200910036905.3
• 申請日: 2009-01-22
• 公開（公告）號: CN101481720A
• 公開（公告）日: 2009-07-15
• 發明（設計）人: 宗敏華;李寧;陳西余
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12P19/38
• 分類號: C12P19/38
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司
• 代理人: 李衛東

技術領域

本發明涉及在混合溶劑中酶催化合成如通式(I)所示的化合物的方法。

背景技術

5-氮雜胞苷(5-azacytidine)是一類非天然核苷，在臨床上是一種重要的治療白血病藥物(Momparler?R.L.，et?al，Leuk.Res.，1984，8：1043-1049)。于2004年5月19日被FDA批準上市，申請注冊號為NDA050794，用于治療骨髓發育不良綜合癥(Myelodysplastic?Syndrome，MDS)的處方藥。研究表明該藥物主要通過干擾DNA的甲基化過程，使骨髓中異常血細胞的DNA發生低甲基化而產生抗白血病活性。其抗白血病的機制是：在脫氧胞苷激酶的作用下進行磷酸化后，成為DNA甲基化酶(DNA-(胞嘧啶-5)甲基轉移酶)的活性抑制劑，從而誘導了癌細胞分化或激活了腫瘤抑制基因，表現出抗腫瘤活性(Cheng?X.，Curr.Opin.Struct.Biol.，1995，5：4-10)。

但目前5-氮雜胞苷在臨床應用中仍存在諸多缺點(Beisler?A.J.，J.Med.Chem.，1978，21：204-208；Laliberte?J.，et?al，Cancer?Chemother.Pharmacol.，1992，30：7-11；Chabot?G.G.，et?al，Biochem.Pharmacol.，1983，32：1327-1328)：(1)胞嘧啶中5位氮原子的插入導致嘧啶環不穩定，容易受親核試劑的進攻，故該藥物在水溶液中不甚穩定，臨床上需要臨時配制進行給藥；(2)在血漿胞苷脫氨酶作用下，5-氮雜胞苷會迅速降解為非活性代謝物尿苷，導致在人體血漿中的半衰期過短；(3)由于體內脫氧胞苷激酶的缺失或受到過量的dCTP的反饋抑制而不能催化5-氮雜胞苷進行磷酸化，不能成為DNA甲基化酶的活性抑制劑，從而不能誘導癌細胞分化，發揮其抗腫瘤活性。

核苷類藥物水溶性強，脂溶性低，難以透過細胞膜，故口服生物利用度較低。大量研究表明，對原藥的糖基進行適當的酰化改造而得到的核苷酯類新藥不僅表現出更高的口服生物利用度，而且具有比原藥更高的抗病毒或抗腫瘤活性，更廣的抗癌及抗病毒譜，增強了其在血漿中的穩定性，延長了作用時間(DeClercq，E.and?Field?H.J.，Br.J.Pharmacol.，2006.147(1)：1-11)。

核苷類化合物糖環上羥基眾多，且反應活性相似。采用一般化學方法直接酯化時，區域選擇性低，易產生大量的副產物，產物分離困難；為合成特定位置的酰化產物，需要對糖環羥基進行保護和去保護等操作，反應步驟多、工藝復雜；同時，該法通常采用堿性催化劑，易產生含堿廢液，對環境造成嚴重污染(Xia?Z.P.，Wiebe?L.I.，Miller?G.G.，et?al.Arch.Pharm.，1999，332：286-294)。而酶法條件溫和，能在常溫下高效催化酰化反應，且區域選擇性高，可以根據需要合成特定結構的酯類衍生物，并且工藝簡單、環境友好。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術存在的問題，提出一種產物純度高、工藝簡單可控的酶催化合成5-氮雜胞苷酯的方法。

本發明以羧酸酯或酸酐為酰基供體，利用酶催化5-氮雜胞苷進行酰化反應，合成如通式(I)所示的化合物。通過選擇不同酶可以合成5-氮雜胞苷的3′-酯、5′-酯及3′，5′-二酯衍生物。本發明的目的通過如下技術方案實現：

一種混合溶劑中酶促合成5-氮雜胞苷酯衍生物的方法：在混合溶劑體系中加入5-氮雜胞苷和酰基供體，酰基供體與5-氮雜胞苷的摩爾比為1.1—30:1，按5-氮雜胞苷與酶的質量比為0.1—10：1加入酶，在溫度為20—70℃、振蕩速度為100—300rpm、常壓下進行酰化反應，分離得到5-氮雜胞苷酯衍生物通式如下：

其中R₁和R₂代表酰基基團或氫原子，但R₁和R₂不同時為氫原子