[發(fā)明專利]一種低產(chǎn)蛋白酶A的啤酒酵母的篩選方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910036880.7
• 申請日: 2009-01-22
• 公開（公告）號: CN101481661A
• 公開（公告）日: 2009-07-15
• 發(fā)明（設計）人: 王德良;李惠萍;李琳;宋緒磊;孔祥誠
• 申請（專利權）人: 廣州珠江啤酒股份有限公司
• 主分類號: C12N1/18
• 分類號: C12N1/18;C12C11/00;C12R1/645
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司
• 代理人: 李德魁

1、一種低產(chǎn)蛋白酶A啤酒酵母的篩選方法，包括以下步驟：

(1)將被篩選啤酒酵母菌株涂布YPD平板，28℃培養(yǎng)2-3天；

(2)挑選生長旺盛的菌落接種至甘油平板，28℃培養(yǎng)3天，激活蛋白酶A活性；

(3)將酸變性血紅蛋白覆蓋液均勻倒于甘油平板，37℃放置2-3天；

(4)在甘油平板中加入三氯醋酸平鋪，根據(jù)水解圈大小判斷蛋白酶A的酶活高低，將水解圈小的菌株篩選出來，獲得要篩選的目標菌株。

2、根據(jù)權利要求1所述的低產(chǎn)蛋白酶A啤酒酵母的篩選方法，其特征在于，所述酸變性血紅蛋白覆蓋液含有以下成分：1.5％(w/v)瓊脂；0.3％(w/v)，pH值為3.0的酸變性血紅蛋白；0.22％(v/v)Triton?X-100；0.05M，pH值為4.5的磷酸二氫鉀緩沖液。

3、根據(jù)權利要求2所述的低產(chǎn)蛋白酶A啤酒酵母的篩選方法，其特征在于，所述酸變性血紅蛋白覆蓋液通過以下步驟制得：

A.配制0.1M，pH值為3.0的甘氨酸-鹽酸緩沖液；

B.配制3％(w/v)的血紅蛋白溶液，用4M的HCl溶液調(diào)節(jié)pH值至1.0，放置1.5小時并同時在紫外燈下照射30-40分鐘后，用0.1M的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至3.0，然后用步驟A所制得的甘氨酸-鹽酸緩沖液進行稀釋，制得1％(w/v)，pH值為3.0的酸變性血紅蛋白溶液；

C.配制0.05M，pH值為4.5的磷酸二氫鉀緩沖液，121℃下滅菌15min；

D.將1.5％(w/v，以終體積計算)瓊脂粉、0.22％(v/v，以終體積計算)Triton-X100溶解于0.05M，pH值為4.5的磷酸二氫鉀緩沖液中，煮沸至瓊脂溶解，然后冷卻；

E.將步驟B所制得的酸變性血紅蛋白溶液與步驟D所制得的混合溶液按照體積比為3∶7的比例混合均勻。

4、根據(jù)權利要求1所述的低產(chǎn)蛋白酶A啤酒酵母的篩選方法，其特征在于：所述三氯醋酸的濃度為10％(v/v)，添加量為1-2ml。

5、根據(jù)權利要求1至4的其中之一所述的低產(chǎn)蛋白酶A啤酒酵母的篩選方法，其特征在于：所述被篩選啤酒酵母菌株是經(jīng)過基因修飾的或者未經(jīng)基因修飾自然篩選的啤酒酵母菌株。

6、權利要求1所述的低產(chǎn)蛋白酶A啤酒酵母的篩選方法在釀造純生啤酒中的應用。