[發明專利]一種側面組裝的金納米棒標記抗體定量檢測氨芐青霉素的方法

無效

• 申請號: 200910035792.5
• 申請日: 2009-10-16
• 公開（公告）號: CN101699286A
• 公開（公告）日: 2010-04-28
• 發明（設計）人: 胥傳來;朱穎越;陳偉;徐麗廣;馬偉;彭池方
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531;G01N15/02
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

1.一種側面組裝的金納米棒標記抗體定量檢測氨芐青霉素的方法，其特征 是首先分別將氨芐青霉素抗體及包被原修飾到金納米棒上去，再加氨芐青霉素 標準品或待測上清液，氨芐青霉素標準品與包被原競爭修飾在金納米棒上的抗 體，隨著加入的氨芐青霉素標準品的量的不同，所形成的抗體與包被原的金納 米棒的側面組裝的免疫聚合物的粒徑大小不同，由此用激光粒度儀進行檢測而 完成對含氨芐青霉素待測樣品的檢測；步驟為：

(1)氨芐青霉素抗體及包被原與金納米棒的偶聯：

a.抗體與金納米棒偶聯：0.5mL、100μg/mL的氨芐青霉素抗體逐滴加入用 0.1mol/L的碳酸鉀預調至pH?8.5-8.8、0.5mL、2n?mol/L金納米棒溶液中，室溫 震蕩混勻，37℃反應1h，反應結束6000rpm離心20min，去除未結合的抗體， 重懸在pH?7.4、含0.5％聚乙二醇20000的0.01mol/L的PBS中，制得修飾氨芐青 霉素抗體的金納米棒溶液；

b.包被原與金納米棒偶聯：0.5mL、100μg/mL的氨芐青霉素包被原逐滴加 入用0.1mol/L的鹽酸預調至pH?5、0.5mL、2n?mol/L的金納米棒溶液中，室溫 震蕩混勻，37℃反應1h，反應結束6000rpm離心20min，去除未結合的包被原， 重懸在pH?7.4、含0.5％PEG20000的0.01mol/L的PBS中，制得修飾氨芐青霉素 包被原的金納米棒溶液；

所述的氨芐青霉素抗體及包被原修飾的金納米棒是將氨芐青霉素抗體及包 被原用靜電作用的方法偶聯到帶有正電荷的金納米棒的表面；金納米棒是十六 烷基三甲基溴化銨修飾的金納米棒，長徑比為3；

(2)金納米棒側面組裝

10μL修飾氨芐青霉素包被原的金納米棒溶液與10μL不同濃度的氨芐青霉 素標準品加入到1.5mL的離心管中，充分混勻，再加入10μL修飾氨芐青霉素抗 體的金納米棒溶液，漩渦混勻，37℃孵育0.5h后，取20μL反應液稀釋到體積為 1mL，加入到塑料檢測小池中，測反應完的金納米棒側面組裝的免疫聚合物的粒 徑；

所述修飾氨芐青霉素抗體的金納米棒溶液、修飾氨芐青霉素包被原的金納 米棒溶液，所用的溶液皆為pH?7.4、0.01mol/L的PBS緩沖液；氨芐青霉素標準 品濃度C分別為0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、100ng/mL；

(3)激光粒度儀檢測，繪制金納米棒免疫聚合物的粒徑Size～氨芐青霉素 濃度C標準曲線Size～C：

用英國馬爾文激光粒度儀檢測用不同濃度C的氨芐青霉素標準品側面組裝 的金納米棒免疫聚合物的粒徑Size，檢測溫度為20℃，檢測角度為173°，激發 光源波長633nm，激光功率5mW；繪制標準曲線Size～C；

(4)激光粒度儀定量檢測：

10μL修飾氨芐青霉素包被原的金納米棒溶液與10μL含氨芐青霉素的樣品加 入到1.5mL的離心管中，充分混勻，再加入10μL修飾氨芐青霉素抗體的金納米棒 溶液，漩渦混勻，37℃孵育0.5h后，取20μL反應液稀釋到體積為1mL，加入到塑 料檢測小池中，測反應完的金納米棒側面組裝的免疫聚合物的粒徑Size，以聚合 物的粒徑Size與標準曲線Size～C對照，求出樣品中氨芐青霉素的濃度C。