[發明專利]一種羅丹明B完全抗原的合成方法無效
| 申請號： | 200910031727.5 | 申請日： | 2009-06-20 |
| 公開（公告）號： | CN101585877A | 公開（公告）日： | 2009-11-25 |
| 發明（設計）人： | 胥傳來;宋珊珊;林菲 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C07K14/765 | 分類號： | C07K14/765;C07K1/34;C07K1/113 |
| 代理公司： | 無錫市大為專利商標事務所 | 代理人： | 時旭丹;劉品超 |
| 地址： | 214122江蘇省無錫*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 羅丹 完全 抗原 合成 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種羅丹明B完全抗原的合成方法，其特征是以羅丹明B為半抗原，用 混合酸酐法將其與載體蛋白BSA偶聯，用分光光度法測定偶聯物的偶聯比；步 驟為：
(1)羅丹明B完全抗原的合成：
配制A液：20mg羅丹明B溶于1mL?DMF中，全溶后冰浴下加10μL三丁 氨混勻后再加10μL氯甲酸異丁酯磁力攪拌1h；
配制B液：40mg?BSA溶于3mL?pH7.4的磷酸鹽緩沖液中，4℃保存備用；
冰浴下將A液逐滴加入B液中，然后置4℃下溫孵3h，即得羅丹明B完全 抗原混合液；
透析袋前處理：取10cm的透析袋，于沸水中煮沸5min，再用60℃的去離 子水沖洗3min，保存在4℃去離子水中備用；
透析：將羅丹明B完全抗原混合液移入透析袋中，用2×2L的0.01M的pH7.4 的磷酸鹽緩沖溶液和2×2L的去離子水透析3天，最后使用凍干法將透析袋中 的液體制成粉末，即得到羅丹明B完全抗原；
(2)羅丹明B完全抗原的鑒定：羅丹明B完全抗原采用分光光度法鑒定 其偶聯結果，利用牛血清蛋白標準液得到標準曲線，從曲線上比對得到抗原溶 液的蛋白濃度，計算摩爾吸光系數ε，再測定羅丹明B完全抗原的偶聯比。
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