[發明專利]一種人外周血RORγt轉錄本熒光定量PCR檢測方法

無效

• 申請號: 200910030211.9
• 申請日: 2009-03-17
• 公開（公告）號: CN101580874A
• 公開（公告）日: 2009-11-18
• 發明（設計）人: 王勝軍;王海生;彭素芳;陳建國;吳朝陽;史燁;楊先知;許化溪
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 盧亞麗

1.一種人外周血RORγt轉錄本熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，首先設計特異性熒光定量引物，然后建立實時定量PCR反應體系和反應程序，制備含有目的片斷RORγt的質粒作為標準質粒繪制標準曲線，最后待測樣品與標準質粒同時擴增，根據標準曲線確定樣品目的基因的拷貝數；所述的特異性熒光定量引物序列如下：

正向引物：5’-CCTGGGCTCCTCGCCTGACC-3’

反向引物：5’-TCTCTCTGCCCTCAGCCTTGCC-3’

所述標準質粒所含目的基因序列如SEQ.ID.NO.1所示；

所述的檢測方法排除疾病診斷目的。

2.根據權利要求1所述的一種人外周血RORγt轉錄本熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，上述熒光定量PCR反應體系由下列組分構成：10μl?2×SYBR?MIX，20μM正向引物、反向引物各0.2μl，0.12μl?Taq酶，1μl標準質粒或樣本cDNA，補充滅菌水至于20μl。

3.根據權利要求1所述的一種人外周血RORγt轉錄本熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，PCR反應程序為94^oC?5min，94^oc?30sec，65^oC?30sec?，72^oC?30?sec，88^oC?10sec收集熒光，擴增40個循環，72^oC?7min。