[發(fā)明專利]乳糖診斷/測定試劑(盒)及乳糖濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910028576.8
• 申請日: 2009-02-04
• 公開（公告）號: CN101793686A
• 公開（公告）日: 2010-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N35/00;C12Q1/26;C12Q1/54;C12Q1/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種乳糖診斷/測定試劑(盒)，同時本發(fā)明還涉及測定乳糖濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

乳糖是嬰幼兒主要的能量來源，進(jìn)入體內(nèi)后經(jīng)小腸乳糖酶作用分解成葡萄糖和半乳糖，半乳糖是嬰幼兒腦發(fā)育的必需物質(zhì)，與嬰幼兒大腦的迅速成長有密切聯(lián)系。為防止乳清粉中摻加用其他還原糖如葡萄糖替代乳糖，乳糖的檢測十分必要。

牛奶是一種營養(yǎng)豐富的食品，但如飲用不當(dāng)，也會給健康帶來不良影響。很多人在飲奶后出現(xiàn)腹部不適、腹脹、多屁、腹痛甚至腹瀉等癥狀，這種現(xiàn)象在醫(yī)學(xué)上稱為乳糖不耐受癥，其原因是這些人小腸缺乏乳糖酶、不能消化牛奶中的乳糖，乳糖進(jìn)入結(jié)腸后，經(jīng)結(jié)腸中的細(xì)菌發(fā)酵，產(chǎn)生大量氣體、醋酸等物質(zhì)所致。大量研究證實，患有乳糖不耐受的人還有大部分沒有任何癥狀、只有人體生化指標(biāo)改變的隱性不耐受者，醫(yī)學(xué)上稱為乳糖吸收不良或乳糖酶缺乏。

據(jù)統(tǒng)計，全世界都存在乳糖不耐受的問題，其中亞洲人發(fā)生率最高，為95％-100％。據(jù)中國疾病控制中心調(diào)查，我國北京、上海、廣州等地3-13歲兒童乳糖不耐受癥和乳糖吸收不良的發(fā)生率約為80％。乳糖不耐受除引起消化道癥狀外，還可造成人體營養(yǎng)吸收不良。據(jù)國外研究，乳糖不耐受可減少鈣的攝入、減少峰值骨量、增加骨丟失從而引發(fā)骨質(zhì)疏松癥，乳糖不耐受可影響鐵和鋅的吸收，造成鐵缺乏和鋅缺乏，并可影響小兒的腦發(fā)育，對人體健康危害很大。

在食品分析領(lǐng)域中，酶分析法是廣為使用并倍受諸如ISO等國際標(biāo)準(zhǔn)機構(gòu)推薦的一種方法。酶析法理論發(fā)展成熟并且已為實驗室普遍接受。使用高質(zhì)量經(jīng)純化的酶可以實現(xiàn)對復(fù)雜物質(zhì)中特定成份的檢測。該方法可以檢測的目標(biāo)代謝物有糖類、酸類及其鹽類、醇類和其他物質(zhì)等。由此，各種食品樣品均可被快速檢測并獲得良好的結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，計量通過酶聯(lián)反應(yīng)生成吲嗒胺色原(Indamine?dye)或醌亞胺色原(Quioneimine?dye)所導(dǎo)致在400-700nm波長處吸光度的上升，得以測定乳糖濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現(xiàn)該方法的乳糖診斷/測定試劑(盒)，采用該試劑不僅可以在可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進(jìn)行乳糖濃度測定，而且測定速度快、靈敏度大、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明乳糖濃度測定方法如下：

乳糖+水半乳糖苷酶葡萄糖+半乳糖

半乳糖+氧半乳糖氧化酶半乳糖己糖雙醛糖+過氧化氫

過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或

????????????????????????????????????醌亞胺色原+水

這個方法應(yīng)用半乳糖苷酶(Galactosidase；EC?3.2.1.23)(偶)聯(lián)半乳糖氧化酶(galactose?Oxidase；EC?1.1.3.9)及過氧化物酶(peroxidase；EC?1.11.1.7)酶促反應(yīng)終點比色法。半乳糖苷酶酶解乳糖反應(yīng)產(chǎn)生半乳糖，再通過(偶)聯(lián)合半乳糖氧化酶的作用，最后生成的過氧化氫在過氧化物酶的作用下，將無色的還原型色原體組合氧化成有色的染料，從而可以通過可見光分析儀器，在400-700nm(根據(jù)還原型色原體組合的不同而定)波長處，測定染料-吲嗒胺色原(Indamine?dye)或醌亞胺色原(Quioneimine?dye)-含量高低的光吸收大小；通過測量400-700nm(根據(jù)還原型色原體組合的不同而定)處吸光度上升的程度，得出乳糖濃度大小測定結(jié)果。

實驗表明，從測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟性兩方面綜合考慮，如下成分關(guān)系的本發(fā)明乳糖診斷/測定試劑(盒)較為理想：

緩沖液??????????????????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑??????????????????????????500mmol/L

過氧化物酶??????????????????????30000U/L

半乳糖苷酶??????????????????????10000U/L

半乳糖氧化酶????????????????????12000U/L

還原型色原體組合????????????????0.1-20mmol/L