[發明專利]具有抗腫瘤活性的靈芝子實體提取物及其制備方法

無效

• 申請號: 200910027230.6
• 申請日: 2009-05-25
• 公開（公告）號: CN101559083A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發明（設計）人: 陳彥;賈曉斌;宋師花
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫藥研究院
• 主分類號: A61K36/074
• 分類號: A61K36/074;A61P35/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所
• 代理人: 栗仲平

技術領域：

本發明涉及中藥靈芝子實體提取物，具體地說是涉及一種具有抗腫瘤活 性的靈芝子實體提取物，以及這種具有抗腫瘤活性的靈芝子實體提取物的制 備方法。

背景技術：

靈芝為多孔菌科真菌，有幾千年的藥用歷史，收載于中國最早的本草學 專著《神農本草經》。兩千多年以來，人們一直用靈芝來預防、治療腫瘤； 現代科學研究也表明，靈芝有較強的抗腫瘤作用。

靈芝三萜類成分被公認為靈芝抗腫瘤的有效成分之一。關于靈芝三萜類 成分的提取，常用乙醇加熱回流提取，其存在有機溶劑殘留多、提取溫度高、 成本相對較高等缺點。超臨界CO₂流體技術是提取靈芝三萜類成分的最新技 術，克服了以上缺點。中國專利200510047263.9公開了CO₂-SFE在提取靈芝 子實體中三萜類物質上的應用。

雖然目前關于靈芝子實體超臨界CO₂萃取三萜類組分的提取工藝研究較 多，但對三萜類組分的純化研究卻相對較少，臨床多以超臨界CO₂萃取物直 接用藥，或將純化后的靈芝三萜酸類成分用于治療。

李保明(參見：李保明，劉超，王洪慶，等.靈芝總三萜酸含量測定方法的研 究[J].中國中藥雜志，2007，32(12)1234-1236.)報道將靈芝子實體用乙醇加熱回 流提取，氯仿溶解，飽和碳酸氫鈉溶液堿提，鹽酸酸化，氯仿萃取的方法獲 得靈芝三萜酸類成分；中國專利200310117112.7公開了一種靈芝三萜類抗腫 瘤組分的提取方法，它將靈芝子實體用甲醇或乙醇超聲循環浸提，然后用飽 和碳酸氫鈉溶液堿提，鹽酸酸化，再用氯仿萃取將酸化后的三萜酸類成分， 減壓蒸干得到三萜酸類組分。以上報道有一個共同之處，即均將飽和碳酸氫 鈉溶液堿提之后的氯仿層棄掉，僅保留飽和碳酸氫鈉溶液堿提液中的三萜酸 類成分，將之酸化并萃取出。

發明內容

本發明的目的，是提供一種具有抗腫瘤活性的靈芝子實體提取物，這是 一種從靈芝子實體超臨界CO₂萃取物中獲得的具有抗腫瘤活性的提取物。本 發明還提供這種具有抗腫瘤活性的靈芝子實體提取物的制備方法。本發明將 克服以往普遍使用靈芝三萜中三萜酸類成分，而忽略其中含有的其它具有抗 腫瘤活性成分利用的問題。

完成本申請第1個發明任務的方案是，一種具有抗腫瘤活性的靈芝子實 體提取物，其特征在于，其中三萜類成分的含量為30～70wt％；同時，該提 取物中含有的有效成分還用以下方法表征：用高效液相色譜條件1表征提取 物，由色譜峰保留時間在80～128min之間的成分組成(圖1)；用高效液相 色譜條件2表征提取物，主要包含色譜峰保留時間為14.89～15.67min、 30.74～31.35min、34.36～34.98min、37.03～37.64min、39.47～40.01min的5 個成分(圖2)。

所述的高效液相色譜條件1為：ZORBAX?SB-C18柱(4.6mm×250mm， 5μm)；流動相：A：乙腈，B：0.05％磷酸水溶液，線性梯度洗脫，0min：27％A； 40min：27％A；60min：35％A；80min：45％A；90min：65％A；100min：75％A；110 min：85％A；120min：100％A；128min：100％A；流速：1.0mL·min-1；檢測波長： 254nm；柱溫：30℃。

在此條件下，靈芝子實體超臨界CO₂萃取的粗提物由色譜峰保留時間在 0～128min之間的所有成分組成(圖3)；該粗提物的碳酸氫鈉萃取層(即以 往普遍使用的靈芝三萜酸類成分)由色譜峰保留時間在0～80min之間的所 有成分組成(圖4)，色譜峰保留時間在80～128min之間的所有成分組成本提 取物。

高效液相色譜條件2為：ZORBAX?SB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)； 流動相：A：乙腈，B：0.05％磷酸水溶液，線性梯度洗脫，0min：60％A；25 min：90％A；40min：100％A；45min：100％A；流速：1.0mL·min-1；檢測波長： 240nm；柱溫：30℃。

三萜類成分含量測定方法：用分光光度法，以熊果酸為對照品，在檢測 波長為543nm下測定，供試品及空白樣品的光譜掃描圖見圖5、圖6、圖7。