[發(fā)明專利]一種用于腫瘤病理診斷用途的免疫組織化學(xué)診斷試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910022400.1
• 申請日: 2009-05-07
• 公開（公告）號: CN101598731A
• 公開（公告）日: 2009-12-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 米力;陳小春;張陽;陳志南
• 申請（專利權(quán)）人: 陳志南
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574;G01N1/30
• 代理公司: 西安恒泰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所
• 代理人: 李鄭建

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，涉及一種用于臨床診斷的試劑盒，特別是一種用于腫瘤病理診斷用途的HAb18G/CD147癌標(biāo)志物的免疫組織化學(xué)診斷試劑盒。?

HAb18G/CD147癌標(biāo)志物是一種新型、廣譜和較高特異性的癌標(biāo)志物，用一種針對HAb18G/CD147癌標(biāo)志物的特異性抗體，結(jié)合通用的免疫組化方法，制成HAb18G/CD147癌標(biāo)志物免疫組織化學(xué)診斷試劑盒，應(yīng)用于多種上皮源性惡性腫瘤組織病理標(biāo)本，進(jìn)行腫瘤病理診斷，有助于腫瘤的預(yù)警篩選、早期診斷、定性診斷、治療反應(yīng)及療效監(jiān)測、腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷。?

背景技術(shù)

近年來，各種腫瘤的發(fā)病人數(shù)都在急劇上升，腫瘤的醫(yī)療費(fèi)用和腫瘤患者的死亡都會給社會和家庭造成沉重的負(fù)擔(dān)。人們迫切需要可用于腫瘤的診斷和治療的技術(shù)手段或方法。當(dāng)前，以預(yù)測醫(yī)學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)與個(gè)體化醫(yī)療為核心的3P醫(yī)學(xué)已經(jīng)成為保證、提高人類健康水平的重要方向，癌標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用是實(shí)現(xiàn)3P醫(yī)學(xué)的重要關(guān)鍵。?

癌標(biāo)志物(tumor?marker)是存在于腫瘤細(xì)胞內(nèi)或由其分泌的一種物質(zhì)，可分布于血液、組織液、分泌物或腫瘤細(xì)胞中。癌標(biāo)志物的變化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有著直接關(guān)系，如提示腫瘤的性質(zhì)，了解腫瘤的組織發(fā)生、細(xì)胞分化，有助于腫瘤的預(yù)警篩選、早期診斷、定性診斷、治療反應(yīng)及療效監(jiān)測、腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷，有助于腫瘤的診斷、分子分型及個(gè)體化治療指導(dǎo)。?

近年來，由于生物技術(shù)的快速發(fā)展，單抗技術(shù)、蛋白組學(xué)技術(shù)、生物信息學(xué)的應(yīng)用，大大加快了新型腫瘤標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用。其技術(shù)基礎(chǔ)大都是通過用抗體篩選腫瘤細(xì)胞芯片、cDNA表達(dá)文庫，結(jié)合酵母雙雜交、免疫共沉淀、質(zhì)譜技術(shù)等方法，捕獲該抗體所針對的抗原分子。新型腫瘤標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)與應(yīng)用，對建立腫瘤預(yù)警篩查、早期診斷、定性診斷、治療反應(yīng)和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)等預(yù)后監(jiān)測等具有重要作用。?

免疫組化是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究。目前免疫組織化學(xué)已廣泛應(yīng)用與臨床病理學(xué)診斷，特別是用針對性地抗體進(jìn)行腫瘤輔助診斷和鑒別診斷，成為臨床病理學(xué)診斷不可缺少的重要手段。?

HAb18G/CD147分子是一種新型癌標(biāo)志物，該分子為61kDa的跨膜糖蛋白，由269個(gè)氨基酸組成的分子，是用特異性單抗在人肝癌細(xì)胞cDNA表達(dá)文庫中篩選獲得。其單抗為HAb18(專利號：ZL02114471.0)，是用新鮮人肝癌組織細(xì)胞懸液免疫Bab1/C小鼠，用雜交瘤技術(shù)制備而成。?

HAb18G/CD147癌標(biāo)志物免疫組織化學(xué)診斷試劑盒，用于腫瘤病理診斷，經(jīng)免疫組化組織譜鑒定，該分子在多種癌組織中高表達(dá)，在正常組織和胚胎組織中極低表達(dá)，分布有較好特異性，染色表型為膜型或膜漿型。?

2006例組織芯片的免疫組化結(jié)果表明，HAb18G/CD147癌標(biāo)志物在以下癌癥中的表達(dá)率為：乳腺癌(陽性率：71.4％)、肝癌(陽性率：80.0％)、胃癌(陽性率：68％)、肺癌(陽性率：54.3％)。而在正常肝組織、肝腺瘤病變組織中為低表達(dá)；在乳腺的正常組織、良性腫瘤和良性病變組織為陰性。應(yīng)用ABC-APAAP等多種高敏感免疫組化染色法，對肝癌組織切片在光鏡和電鏡兩個(gè)水平上觀察HAb18G的分布與定位，結(jié)果顯示HAb18G/CD147癌?標(biāo)志物選擇性地高表達(dá)于肝癌組織，其陽性率為75％(39/52)，正常肝組織低表達(dá)。免疫電鏡(膠體金)定位于肝癌細(xì)胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及管泡狀結(jié)構(gòu)的單位膜上。研究結(jié)果發(fā)表于Proteomics，7(13)：2151-2161，2007；Histopathology，2008。?

單克隆抗體的問世與免疫組織化學(xué)檢測系統(tǒng)持續(xù)快速的發(fā)展，使免疫組織化學(xué)技術(shù)在現(xiàn)代病理診斷中的應(yīng)用日益廣泛，且被受病理界的關(guān)注與青迷。最早與70年代初期僅在實(shí)驗(yàn)室中科研嘗試，歷經(jīng)30年時(shí)間后該項(xiàng)技術(shù)已經(jīng)發(fā)展成為常規(guī)病理診斷中必不可少的可靠的輔助診斷手段。?

在常規(guī)病理診斷中，大多數(shù)病例是可以在HE染色的切片上做出明確的形態(tài)學(xué)診斷，有疑難和問題的病例在5-10％。免疫組織化學(xué)技術(shù)主要通過特異性抗體染色，對臨床病理組織切片做進(jìn)一步的診斷，分析腫瘤標(biāo)志物、腫瘤相關(guān)抗原與疾病的關(guān)系，以輔助診斷提高病理診斷的準(zhǔn)確性。?