[發明專利]一種用于腫瘤病理診斷用途的免疫組織化學診斷試劑盒

有效

• 申請號: 200910022400.1
• 申請日: 2009-05-07
• 公開（公告）號: CN101598731A
• 公開（公告）日: 2009-12-09
• 發明（設計）人: 米力;陳小春;張陽;陳志南
• 申請（專利權）人: 陳志南
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574;G01N1/30
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所
• 代理人: 李鄭建

1.一種用于腫瘤病理診斷用途的HAb18G/CD147癌標志物的免疫組織化學 診斷試劑盒，臨床應用于上皮源性惡性腫瘤的輔助診斷或鑒別診斷， 其特征在于，該試劑盒的內容物包括：

1）用于去除人組織切片中內源性酶的阻斷劑，該阻斷劑是由濃度為3 %的過氧化氫溶液和濃度為80%的甲醇溶液組成；

2）用于封閉人組織切片中交叉蛋白反應非特異性染色的非特異性蛋白 封閉劑；該封閉劑是由3-5%正常動物血清與磷酸鹽緩沖液配制而成；

所述的人組織切片為石蠟切片和冰凍切片；

3）與人體癌組織中HAb18G/CD147癌標志物結合的第一抗體；該第一抗 體是特異性結合HAb18G/CD147癌標志物的鼠源性單克隆抗體，其使用 濃度為10-100μg/mL；

所述的第一抗體在10-100μg/mL濃度的抗體保存液中保存，該抗體保 存液包括有1%牛血清白蛋白、0.1%膠原、0.01mol/L磷酸鹽緩沖液、0 .05%?NaN₃，該抗體保存液能夠維持第一抗體在2-8℃下保存24個月；

4）能與第一抗體結合的第二抗體；該第二抗體是生物素標記的羊或兔 抗小鼠IgG的多克隆抗體；

5）用來結合第二抗體上生物素的酶標鏈霉親和素；該酶標鏈霉親和素 是辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素，為顯色底物；

6）與顯色底物作用的顯色試劑，該顯色試劑是聯苯二胺（DAB）溶液 、三羥甲基氨基甲烷（Tris·Hcl）緩沖液和去離子水配制而成，以上 三種試劑的配制用量體積比為1:1:50；

7）試劑盒所用的緩沖體系為，磷酸鹽緩沖液Na₂HPO₄-NaH₂PO₄-NaCl， 濃度為0.01mol/L，pH為7.2~7.45。

2.權利要求1所述的用于腫瘤病理診斷用途的HAb18G/CD147癌標志 物的免疫組織化學診斷試劑盒在多種癌組織的染色方法，其特征在于 ，包括：

人組織切片用水化后，加適量的內源性酶阻斷劑，反應10分鐘，磷酸 鹽緩沖液清洗；滴加非特異性蛋白封閉劑1~2滴，反應10分鐘；滴加第 一抗體1~2滴，37℃反應2小時，磷酸鹽緩沖液清洗；滴加第二抗體1~ 2滴，22-28℃反應20分鐘，磷酸鹽緩沖液清洗；滴加酶標鏈酶親和素 1~2滴，22-28℃反應15分鐘，磷酸鹽緩沖液清洗；滴加新鮮配制的顯 色試劑1~2滴，22-28℃反應1~10分鐘，磷酸鹽緩沖液清洗；蘇木素染 核，梯度酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片、光學顯微鏡觀察； 上述磷酸鹽緩沖液清洗為每次3遍，震蕩清洗5分鐘。