[發明專利]一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法

無效

• 申請號: 200910021612.8
• 申請日: 2009-03-19
• 公開（公告）號: CN101508958A
• 公開（公告）日: 2009-08-19
• 發明（設計）人: 安德榮;劉雙發
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12R1/00
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司
• 代理人: 韓 翎

一、技術領域：

本發明涉及一種菌株篩選方法，尤其是涉及一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法。

二、背景技術：

彈性蛋白酶(Elastase)是一種以水解不溶性彈性蛋白為特征的廣譜性蛋白水解酶。自從1949年被Balo和Banga發現以來，各國科學家對其的研究便表現得十分活躍，從最初的酶源和純化研究到現今的分子遺傳機理的探索，研究水平越來越深入，很大程度上拓寬了其應用領域。目前，彈性蛋白酶在醫藥、食品、農業、輕工業、服裝加工、環保和生物技術等領域被廣泛運用，并具有極大的開發潛力和商業價值。彈性蛋白酶主要用作治療高血脂癥，是防治動脈粥樣硬化的有效生化藥物，具有改善血清脂質水平，阻止主動脈冠狀動脈斑塊的形成功效；利用彈性蛋白酶降解一些難以處理的結締組織如韌帶、大動脈血管、筋腿等食物蛋白資源，因而被應用食品加工技術進行深加工可制作高蛋白工程食品和功能膚保健食品。在對食用蛋白質的水解能力方面，彈性蛋白酶比木瓜蛋白酶強一倍以上，用作嫩肉劑，彈性蛋白酶將比木瓜蛋白酶具有更大的優越性和可接受性，其應用前景十分廣闊。彈性蛋白酶也是良好的日用化工原料，主要用于保健性化妝品的生產之中。彈性蛋白酶添加入化妝品中，能增進皮膚的血液循環，增強皮膚、毛發的彈性和柔韌性，可延緩皮膚老化；此外，還能促進頭發生長和防止脫發等，是一種新型的美容化妝品基料或加工原料，具有良好的美容保健作用。因此，利用微生物發酵法大規模生產彈性蛋白酶有著具有廣闊的應用發展前景。

在我國，彈性蛋白酶的生產還主要是從豬胰臟中提取，受到臟器資源不足、提取工藝復雜等因素的限制，利用微生物發酵技術進行大規模的生產基本上還是空白，而國外卻已經進行微生物發酵生產并取得了巨大的經濟效益。而采用微生物發酵生產堿性蛋白酶周期短、營養需求低、提取工藝簡單，可實現自動化生產，不受原料限制而進行大規模生產，對國家的可持續發展策略具有深遠的意義。另外，微生物生產彈性蛋白酶技術的開發還存在產物活性不高、性質差異大、基因工程菌不穩定等問題的制約，而篩選出彈性蛋白酶的高產菌株是解決諸多問題的關鍵所在，從自然中直接去篩選高產菌株，是一條最為直接和行之有效的方法。得到蛋白酶高產菌株，對于提高微生物資源的開發和利用，節約動、植物資源，促進酶制劑產業發展意義重大。

三、發明內容：

本發明為了解決上述背景技術中的不足之處，提供一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法，其采用酪蛋白初篩和彈性蛋白復篩，選擇性強，效率高，所得菌株具備作為工業菌株的能力。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法其特征在于：具體篩選過程為：

(1)采樣：樣品采自楊凌高新區農場的秸稈；

(2)純化：樣品處理后采用涂布稀釋法獲得單菌落；

(3)初篩：選用以酪蛋白(脫脂奶粉)為底物的培養基進行初篩；

(4)復篩：選用以彈性蛋白(牛筋)為底物的培養基進行復篩。

上述取樣方法為：雨后7-8天，采取麥稈及稻桿，裝入滅菌的紙袋。

上述初篩培養基以脫脂奶粉為底物，具體配方(％，w/v)為：脫脂奶粉2.5，酵母膏0.1，葡萄糖0.1，MgSO₄·7H₂O?0.01，KH₂PO₄?0.05，K₂HPO₄?0.1，瓊脂2.0，pH7.0

上述復篩培養基以牛筋為底物，具體配方(％，w/v)為：牛筋5.0，酵母膏0.1，葡萄糖0.1，MgSO₄·7H₂O?0.01，KH₂PO₄?0.05，K₂HPO₄?0.1，pH7.0

上述牛筋的制備方法為：稱取新鮮牛筋，80℃烘干或者自然晾干，用萬能粉碎機將其粉碎至顆粒狀。

上述菌株的培養基：

a：斜面培養基(％，w/v)：蛋白胨1.0，酵母浸膏0.5，NaCl?1.0，瓊脂2.0，pH7.0

b：種子培養基(％，w/v)：葡萄糖1.0蛋白胨0.5，酵母膏0.5，KH₂PO₄?0.2，MgSO₄?0.01，

上述培養基均于0.105Mpa蒸汽壓力下滅菌30min。

上述菌株的篩選過程為：

(1)樣品處理