[發明專利]一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法

無效

• 申請號: 200910021612.8
• 申請日: 2009-03-19
• 公開（公告）號: CN101508958A
• 公開（公告）日: 2009-08-19
• 發明（設計）人: 安德榮;劉雙發
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12R1/00
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司
• 代理人: 韓 翎

1、一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法，其特征在于：篩選過程為：

(1)采樣：樣品采自秸稈；

(2)純化：樣品處理后采用涂布稀釋法獲得單菌落；

(3)初篩：選用以酪蛋白為底物的培養基進行初篩；

(4)復篩：選用以彈性蛋白為底物的培養基進行復篩。

2、根據權利要求1所述的一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法，其特征在于：取樣方法為：雨后7-8天，采用麥稈及稻桿，裝入滅菌的紙袋。

3、根據權利要求1或2所述的一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法，其特征在于：初篩培養基以脫脂奶粉為底物，由以下組分組成％?w/v：脫脂奶粉2.5，酵母膏0.1，葡萄糖0.1，MgSO₄·7H₂O?0.01，KH₂PO₄?0.05，K₂HPO₄0.1，瓊脂2.0，pH7.0。

4、根據權利要求3所述的一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法，其特征在于：復篩培養基以牛筋為底物，由以下組分組成％?w/v：牛筋5.0，酵母膏0.1，葡萄糖0.1，MgSO₄·7H₂O?0.01，KH₂PO₄?0.05，K₂HPO₄?0.1，pH?7.0。

5、根據權利要求4所述的一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法，其特征在于：牛筋的制備方法為：稱取新鮮牛筋，80℃烘干或者自然晾干，用萬能粉碎機將其粉碎至顆粒狀。

6、根據權利要求5所述的一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法，其特征在于：菌株的培養基：

a：斜面培養基％，w/v：蛋白胨1.0，酵母浸膏0.5，NaCl?1.0，瓊脂2.0，pH7.0；

b：種子培養基％，w/v：葡萄糖1.0蛋白胨0.5，酵母膏0.5，KH₂PO₄?0.2，MgSO₄?0.01；

上述培養基均于0.105Mpa蒸汽壓力下滅菌30min。

7、根據權利要求5所述的一種蛋白酶高產菌株LSF-An-63的篩選方法，其特征在于：菌株的篩選過程為：

(1)樣品處理：

取樣品少許剪碎，放入250mL三角瓶中鋪滿底部，加蒸餾水浸過樣品，裝量不超過三角瓶容量的1/2，加少量石灰，塞好棉塞，煮沸10min，自然冷卻后放置到恒溫培養箱中38℃培養48h。

(2)純化：

將處理后的樣品培養液在平板培養基上涂布稀釋進行分離純化，38℃培養24h，挑單菌落進行染鏡檢后接種于固體斜面，置于38℃恒溫箱中培養18-24h后于4℃冰箱中保存；

(3)初篩：

將純化得到的單菌落點接于初篩平板培養基上，于恒溫培養箱中38℃培養32h，測量并計算水解圈與菌落直徑比值，將初篩所得的比值大于1.5的菌株進行搖瓶復篩；

(4)復篩：

將初篩得斜面菌種移接于種子液體培養基，38℃培養18-24h后按5％的接種量接種于80ml牛筋復篩培養基，在旋轉式搖床上38℃下170r/min培養48h后觀察比較，將對牛筋分解效果最佳的菌株接種于斜面培養基于冰箱中4℃保存。