[發(fā)明專利]一種四環(huán)素嚴緊調(diào)控的真核表達載體

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200910021010.2
• 申請日: 2009-01-21
• 公開（公告）號: CN101481704A
• 公開（公告）日: 2009-07-15
• 發(fā)明（設計）人: 于軍;陳寶瑩;陳健康;劉利兵;張學策;劉芳娥;梁向艷;楊芳;黃小軍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學
• 主分類號: C12N15/79
• 分類號: C12N15/79;C12N15/64
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司
• 代理人: 陸萬壽

1、一種四環(huán)素嚴緊調(diào)控的真核表達載體，包括啟動子，其特征在于，沿啟動子方向分布有編碼四環(huán)素反應表達框抑制子的rtTA2^S-M2和四環(huán)素反應表達框，所述的四環(huán)素反應表達框包括四環(huán)素控制的雙向啟動子P_tetbi；

所述rtTA2^S-M2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，P_tetbi的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

2、如權利要求1所述的四環(huán)素嚴緊調(diào)控的真核表達載體，其特征在于，雙向啟動子P_tetbi的一側(cè)為能夠重組入外源性興趣基因的讀碼框RFC，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。

3、如權利要求1或2所述的四環(huán)素嚴緊調(diào)控的真核表達載體，其特征在于，雙向啟動子P_tetbi的另一側(cè)為編碼螢光素酶的元件，其核苷酸序列如SEQ?IDNO.4所示。

4、如權利要求1所述的四環(huán)素嚴緊調(diào)控的真核表達載體，其特征在于，在rtTA2^S-M2元件之后還插入EGFP-Puro序列，EGFP-Puro序列是編碼綠色熒光蛋白EGFP和嘌羅霉素抗性蛋白的融合基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示。

5、如權利要求4所述的四環(huán)素嚴緊調(diào)控的真核表達載體，其特征在于，在rtTA2^S-M2元件和EGFP-Puro序列之間還插入核糖體進入位點(IRES)，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示。

6、如權利要求1所述的四環(huán)素嚴緊調(diào)控的真核表達載體，其特征在于，所述的四環(huán)素嚴緊調(diào)控的真核表達載體是重組質(zhì)粒pE11-IGR-RFC，在質(zhì)粒pE11-IGR引入的DNA元件排列如下：hCMV-rtTA2^S-M2-IRES-EGFP-Puro-編碼螢光素酶的元件-P_tetbi-RFC，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示。

7、權利要求6所述的四環(huán)素嚴緊調(diào)控的真核表達載體應用于外源性興趣基因在真核細胞中表達的篩選。